: "Клиническая значимость оценки мутационного статуса генов тирозинкиназ и факторов транскрипции при миелопролиферативных заболеваниях"

• Автор: Сабурова, Ирина Юрьевна
• Шифр специальности: 14.03.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 65 с. : 14 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Острый миелоидный лейкоз: определение, симптоматика, заболеваемость, прогноз, стандартные подходы к терапии.
1.2. ОМЛ - исторические аспекты: диагностика и классификация
1.3. Современные подходы к диагностике ОМЛ. Гены 1МРМ1, ГЬТЗ, СЕВРА, ВААЕС.
1.3.1 Характеристика гена и белка нуклеофосмин (ИРМ 1).
1.3.2 Характеристика гена и белка РБТЗ
1.3.3. Характеристика гена и белка СЕВРА
1.3.4 Характеристика гена и белка ВААЕС'
1.4. Диагностическая значимость мутационного статуса генов ЕЕТЗ
и 1МРМ1 и уровня экспрессии генов ВААЬС И СЕВРА
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Общая характеристика исследуемых групп
2.2. Принципы формирования исследуемых групп
2.3. Получение материала и его характеристика
2.3.1. Выделение лейкоцитов из периферической крови
и косного мозга
2.3.2. Выделение геномной ДНК
2.3.3. Выделение тотальной РНК
2.3.4. Приготовление кДНК
2.4. Контроль качества выделенной ДНК и РНК
2.5. Определение наличия внутренних тандемных дупликаций в гене ЕЬТЗ
2.6. Определение наличия мутации Б835У в гене РЬТЗ

2.7. Определение наличия мутации типов «А» и «В» в гене 1ЫРМ1
2.8. Выявление относительного уровня экспрессии гена ВАЛЬС
2.9. Выявление относительного уровня экспрессии гена СЕВРА
2.10 Учет относительных уровней экспрессии активности генов ВААЕС и СЕВРА.
2.11 Статистическая обработка полученных результатов
Глава 3. ОТЛАДКА ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИХ МЕТОДИК И ИХ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА
3.1. Генетическое типирование наличия мутации типа «А» и «В» в гене ИРМ1
3.2. Генетическое типирование наличия ВТД и 0835У в гене БЫЗ. 58 Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Определение наличия внутренних тандемных дупликаций
в гене БЬТЗ у пациентов с ОМЛ
4.2. Определение наличия мутации 0835У в гене БЬТЗ у пациентов
с ОМЛ
4.3. Определение наличия мутации типа «А» и «В» в гене 1МРМ1 у пациентов с ОМЛ
4.4. Исследование уровня экспрессии гена ВААЕС у пациентов с ОМЛ
4.5. Исследование уровня экспрессии гена СЕВРА у пациентов с

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
В-ОЛЛ - В клеточный острый лимфолейкоз ВТД - внутренние тандемные дупликации кДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота копийная мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота ОЛЛ - острый лифобластный лейкоз ОМЛ - острый миелобластный лейкоз Т-ОЛЛ - Т клеточный острый лимфолейкоз ФАБ - Франко-Американо-Британская классификация ХМЛ - хронический миелолейкоз ЦНС - центральная нервная система ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота ВААЕС - цитоплазматический белок головного мозга и острой лейкемии
СЕВРА - ССААТ/энхансер присоединяющийся протеин альфа СБ - кластеры дифференцировки РЬТЗ - БМБ-подобная тирозинкиназа 3 ЫРМ1 - нуклеофосмин

пациенты с диким типом. Прогностическая значимость мутаций в гене NPM1 показана рядом исследований (Meshinchi S. et al., 2001; Metzelder S. et al., 2009). В отсутствие мутаций гена FLT3 пациенты обладали лучшей выживаемостью, чем при ВТД FLT3 и имели лучший уровень полной ремиссии, безсобытийной, безрецидивной выживаемости, выживаемости без болезни и общей выживаемости. При этом мутации в гене NPM1 не вносили вклада в неблагоприятный прогноз пациентов, несущих ВТД FLT3. При многофакторном анализе комбинированный статус мутированного NPM1 в отсутствии ВТД FLT3 явился благоприятным прогностическим фактором (Gale R.E. et al., 2008; Liso A. et al., 2008).
Мутации в гене СЕВРА ассоциированы с изначально более высокой безсобытийной выживаемостью и общей выживаемостью. Благоприятная прогностическая значимость была подтверждена исследованиями на пациентах с нормальным кариотипом, у которых в 15-19% случаев была выявлена мутация в гене СЕВРА (Liang D.C. et al., 2008). Во время постановки диагноза пациенты с мутациями в гене СЕВРА имели больший процент бластов в крови, меньшую частоту мутаций гена FLT3. Частота полного выздоровления не отличалась между пациентами с или без мутаций в гене СЕВРА, в то время как безсобытийная выживаемость, длительность ремиссии и общая выживаемость были значительно лучше для пациентов, у которых присутствовали мутации в гене СЕВРА.
При многовариантном анализе мутационный статус гена СЕВРА добавлял прогностическую информацию, предоставленную статусом гена FLT3 (Frohling S. et al., 2004; Mrozek K. et al., 2007). Относительно прогностической значимости уровня экспрессии гена СЕВРА не существует к настоящему времени достаточной информации. Однако по предварительному сообщению Lin Т.С. с коллегами, отмечается более длительная выживаемость среди пациентов с повышенным уровнем метилирования промотера (и, вероятно, пониженной экспрессии) гена