Комплексный анализ транскрипционного ответа, индуцированного лигандами Толл-подобных рецепторов 2,4,5, в различных органах грызунов (MusMusculus) и приматов (MacacaMulatta)

• Автор: Артемичева, Наталья Михайловна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 129 с. : ил.

Содержание

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Классификация, структура и функции Толл-подобных рецепторов

1.2 Сигнальные пути, ассоциированные с Толл-подобными рецепторами

1.3 Участие То11-подобных рецепторов в формировании реакций врожденного и приобретенного иммунитета

1.4 Экспрессия Толл-подобных рецепторов различными типами клеток

1.5 Участие Толл-подобных рецепторов в формировании резистентности организма в отношении различных патогенов

1.6 Использование лигандов Толл-подобных рецепторов в медицинской практике

1.7 Заключение

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Материалы
2.1.1 Бактериальные штаммы
2.1.2 Лиганды Толл-подобных рецепторов 2,4,
2.1.3 Лабораторные животные
2.1.4 Ферменты и другие реактивы
2.1.5 Лабораторное оборудование
2.2 Методы
2.2.1 Измерение интенсивности биолюминесценции в организме трансгенных мышей ВАБВ/с в режиме реального времени

2.2.2 Определение интенсивности биолюминесценции в органах трансгенных мышей
2.2.3 Выделение тотальной РНК из мочевого пузыря мыши
2.2.4 Реакция обратной транскрипции
2.2.5. Получение гистологических срезов
2.2.6. Иммуногистохимическое окрашивание гистологических срезов
2.2.7 Окраска гистологических срезов гематоксилином и эозином
2.2.8 Постановка полимеразной цепной реакции
2.2.9. Определение экспрессии белков методом иммуноблотинга
2.2.10. Измерение концентрации цитокинов
2.2.11. Культивирование S. typhimurium
2.2.12. Модель инфекции S. typhimurium на лабораторных животных
2.2.13 Культивирование E.coli
2.2.14 Модель урологической инфекции, вызванной E.coli, на лабораторных животных
2.2.15 Определение количества бактерий методом высева
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Анализ способности лигандов Толл-подобных рецепторов 2,4,5 активировать транскрипционный фактор NF-kB in vivo
3.2 Анализ влияния дозы лигандов TLR на активацию NF-kB в мочевом пузыре
3.3 Определение типа клеток в печени, в которых происходит активация NF-kB в ответ на стимуляцию Толл-подобного рецептора
3.4 Полногеномный анализ изменения экспрессии генов в печени после введения лигандов Толл-подобных рецепторов 2,4,
3.5 Определение влияния стимуляции Толл-подобных рецепторов на уровень
секреции цитокинов в гомогенате печени
3.6 Определение влияния стимуляции Толл-подобных рецепторов на выживаемость мышей при инфекции 5. ґурУїітигіит
3.7 Определение типа клеток в мочевом пузыре мыши, в котором происходит активация КБ-кВ в ответ на стимуляцию ТІЛ
3.8 Определение типа клеток в мочевом пузыре макаки резус, в котором происходит активация ОТ-кВ в ответ на стимуляцию ТІЛ
3.9 Полногеномный анализ изменения экспрессии генов в мочевом пузыре мыши после введения лигандов Толл-подобных рецепторов 2,4,
3.10 Полногеномный анализ изменения экспрессии генов в мочевом пузыре макаки резус после введения лигандов Толл-подобных рецепторов 2,4,5.
3.11 Проверка данных полногеномного анализа транскриптома мыши
3.12 Изменение цитокинового/хемокинового статуса в мочевом пузыре мыши
3.13 Определение влияния лиганда Толл-подобного рецептора 5 на резистентность мышей к урологической инфекции
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

В эпителиальных клетках кишечника обнаружена экспрессия TLR1-9, однако уровни экспрессии данных рецепторов низкие (по сравнению с клетками других типов), что возможно является механизмом регуляции иммунного ответа на естественную микрофлору кишечника (Abreu М., Thomas L., 2003). Было обнаружено, что эпителиальные клетки трахеи, бронхов экспрессируют TLRl-6,9, для эпителия легких показана экспрессия TLR1-9 (Ioannidis II, Ye F, 2013). Изучение экспрессии Толл-подобных рецепторов на клетках репродуктивной системы показало, что эпителиальные клетки маточных труб экспрессируют TLR1,3-6,10, эндометрия и влагалища TLR1-9, шейки матки TLR2-5,7-9, фаллопиевых труб TLR 2, 8-9, эндо- и эктоцервикса TLR1,5,6 (Лебедева О., Калуцкий П., 2010) и экспрессия данных рецепторов может регулироваться в зависимости от фазы менструального цикла.
Показано, что эпителиальные клетки мочевого пузыря экспрессируют TLR
2,4,5,7,9 (Ayari С, Bergeron А, 2011). В эпителии почек обнаружена экспрессия и функциональная активность TLR 2 и 4 (Wolfs Т, Buurman W, 2002).
В таблице 2 содержаться обобщённые данные о Толл-подобных рецепторах, представленных в различных типах клеток.
Таблица 2 - Экспрессия TLR различными типами клеток.
Тип клеток Экспрессия рецепторов
Дендритные клетки TLR
Т-клетки TLR 1-6
В-клетки TLR 1-,2,6,7,9,
Моноциты TLR 1,2
Нейтрофилы TLR1,2
Эозинофилы TLR1,4,7,9,
Базофилы TLR2,4,9,