Влияние антител и цитокинов на эффективность фагоцитоза Staphylococcus aureus

• Автор: Слободчикова, Светлана Вадимовна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 116 с. : 7 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Проблема стафилококковых инфекций

1.2. Классификация и краткая характеристика бактерий рода стафилококк

1.3. Колонизация покровов макроорганизма золотистым стафилококком

1.4. Проникновение стафилококка через барьеры кожи и слизистых

оболочек

1.5. Защитная реакция макроорганизма на S. aureus

1.5.1. Развитие воспаления в ответ на проникновение S. aureus

1.5.2. Значение нейтрофилов в защите от стафилококковой инфекции
1.5.3. Значение гуморального иммунитета в защите от стафилококковой инфекции
1.5.3.1. Значение иммуноглобулинов в защите от стафилококковой инфекции
1.5.3.2. Значение цитокинов в защите от стафилококковой инфекции
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Подготовка объектов фагоцитоза
2.1.1. Подготовка клеток стафилококков
2.1.1.1. Окраска клеток S. aureus флюоресцеина изотиоцианатом
2.1.1.2. Опсонизация клеток S. aureus препаратами антистафилококкового и нормального иммуноглобулинов
2.1.2. Подготовка опсонизированного зимозана
2.1.3. Получение модельных иммунных комплексов
2.2. Исследование иммуноглобулинсвязывающей активности штаммов стафилококка

2.3. Определение средних размеров частиц взвеси стафилококков
2.4. Источник биологического материала
2.5. Культуры крови и определение концентрации цитокинов в СУПЕРНАТАНАХ
2.6. Исследование поглотительной активности лейкоцитов
2.7. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лейкоцитов (JT3XJI)
2.8. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ АНТИТЕЛ НА ФАГОЦИТОЗ S. A UREUS
3.1. Связывание антител различными штаммами стафилококка в зависимости от содержания белка А в клеточной стенке бактерии
3.2. Зависимость поглотительной активности гранулоцитов и моноцитов от опсонизирующей функции антител
3.2.1. Характер поглощения неопсонизированного S. aureus Cowan I гранулоцитами и моноцитами
3.2.2. Влияние нормального иммуноглобулина на фагоцитоз S. aureus Cowan
I гранулоцитами и моноцитами
3.3. Влияние АСИ на поглощение S. aureus гранулоцитами
3.3.1. Исследование поглощения неопсонизированных стафилококков
3.3.2. Влияние АСИ на поглощение S. aureus Wood
3.3.3. Влияние АСИ на поглощение S. aureus Cowan
3.3.4. Влияние штамма стафилококков на поглотительную активность гранулоцитов
3.3.5. Сравнительная характеристика опсонизирующих свойств антистафилококкового и нормального иммуноглобулинов
3.4. Спектротурбидиметрическое определение изменения средних размеров частиц стафилококковых суспензий под влиянием иммуноглобулинов
3.5. Исследование влияния АСИ на ЛЗХЛ лейкоцитов
3.6. Обсуждение

ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ ЦИТОКИНОВ НА ФАГОЦИТОЗ S. AUREUS COWAN
4.1. Цитокиновый ПРОФИЛЬ СУТОЧНЫХ КУЛЬТУР КЛЕТОК ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ,
АКТИВИРОВАННЫХ РАЗЛИЧНЫМИ СТИМУЛЯТОРАМИ
4.1.1. Секреция TNF-a в суточных культурах клеток цельной крови, стимулированных S. aureus Cowan I
4.1.2. Секреция IL-ip и IL-1RA в суточных культурах клеток цельной крови, стимулированных S. aureus Cowan I
4.1.3. Секреция TNF-a, IL-lfl и IL-1RA в суточных культурах клеток цельной крови, стимулированных LPS, РНА и зимозаном
4.2. Влияние супернатантов культур клеток цельной крови,
СТИМУЛИРОВАННЫХ 5. AUREUS COWAN I, НА ПОГЛОТИТЕЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ФАГОЦИТОВ
4.2.1. Влияние супернатантов на поглотительную активность гранулоцитов
4.2.2. Влияние супернатантов на поглотительную активность моноцитов.
4.3. Влияние супернатантов культур крови на ЛЗХЛ лейкоцитов
4.3.1. Влияние супернатантов культур клеток г{елыюй крови, стимулированных S. aureus Cowan I, на уровень J1X3JI лейкоцитов, поглотивгиих стафилококк
4.3.2. Отмена трен талом усиливающего влияния САК на ЛЗХЛ лейкоцитов, поглотивших S. aureus Cowan I
4.4. ЛЗХЛ ЛЕЙКОЦИТОВ в ОТВЕТ HA S. AUREUS И ДРУГИЕ ОБЪЕКТЫ ФАГОЦИТОЗА
4.5. Обсуждение
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

1.5.З.2. Значение цитокинов в защите от стафилококковой инфекции
Стафилококковая инфекция, как и любой воспалительный процесс, требует участия цитокинов - секретируемых клеточных белковых продуктов, выполняющих регуляторную функцию [19; 119], как, например, мобилизацию защитных факторов организма (см. раздел 1.5.1 и 1.5.2).
Последовательная и достаточная выработка цитокинов необходима для привлечения лейкоцитов в очаг инфекции. Так, ЮТ-а, 1Ь-1 р и 1Ь-8 имеют большое значение на ранних этапах развития воспалительной реакции. В моделях стафилококкового и БРв-индуцированного артрита у кроликов было показано, что нейтрализация этих цитокинов в первые 24 часа после заражения приводит к значительному снижению лейкоцитарной инфильтрации очага воспаления [92; 109]. Более позднее введение нейтрализующих агентов подобного эффекта не вызывает [92].
Помимо регуляции численности лейкоцитов, цитокины оказывают влияние на функциональное состояние фагоцитов: осуществляют прайминг нейтрофилов. Под этим термином понимают ряд внутриклеточных процессов, результатом которых является повышение степени готвности фагоцита к уничтожению патогена. Прайминг нейтрофилов включает в себя понижение порога активации ферментов ИАОРН-оксидазы (за счёт частичного фосфорилирования), РЬА2 (рйозрйоНраБе А2, фосфолипаза А2), РЬВ (phospholipa.se Б, фосфолипаза Б), Р13К (рйозрйогаозМёе З-ктазе, фосфоинозитид-3-киназа), увеличение количества АУГБР-рецепторов на поверхности мембраны клетки [47]. Во время фагоцитоза праймированные нейтрофилы вырабатывают большее количество свободных радикалов и, следовательно, проявляют большую бактерицидность, чем фагоциты, которые не подверглись праймингу.
Цитокины отличаются друг от друга по виду и силе оказываемого на нейтрофилы воздействия. Так, ТЫБ-а и СМ-СБР являются более активными праймирующими медиаторами, чем 1Ь-1 (1, 1Б-8, 1Б-18 и 1Б-15 [47]. ТЛБ-а увеличивет эксперсиию СИ.З на поверхности нейтрофилов [55] и запускает