Система интерферонов i типа и nk-клеток при часто рецидивирующем простом герпесе

• Автор: Карсонова, Антонина Васильевна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 с. : 11 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л Вирусологические и патогенетические аспекты простого герпеса

1.2 Механизмы ускользания ВПГ от противовирусного надзора

1.3 Система интерферонов I типа в противовирусной защите

1.4 ИК-клетки

1.4.1 Характеристика ЫК-клсток

1.4.2 ТЧК-клетки и ВПГ-инфекция

1.4.3 Современные методы исследования функциональной активности ИК-клеток: оценка дегрануляции ЕЖ-клеток
1.5 Современные подходы к терапии простого герпеса
1.5.1 Ациклические нуклеозиды
1.5.2 Вакцинотерапия
1.5.3 Иммуномодулирующая терапия
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Пациенты и доноры
2.2 Реактивы, расходные материалы и оборудование
2.2.1 Реактивы для культуральных работ
2.2.2 Моноклональные антитела
2.2.3 Флюоресцентные красители
2.2.4 Прочие реактивы для иммунофлюоресрентной окраски клеток
2.2.5 Реагенты для выделения РНК, обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени
2.2.6 Реагенты для гель-электрофореза
2.2.7 Расходные материалы
2.2.8 Оборудование
2.3 Забор крови и выделение мононуклеарных клеток
2.4 Культивирование клеток К562
2.5 Определение дегрануляции ЕЖ-клеток по экстернализации СОЮ7а
2.6 Определение ИК-активности МНК
2.7 Стимуляция МНК рекомбинантным ИФН-а2Ь
2.8 Оценка уровней ИФН-а в супернатантах стимулированных вирусом клеток методом иммуноферментного анализа (интерфероновый статус)
2.9 Выделение РНК
2.10 Спектрофотометрия
2.11 Г ель-электрофорез
2.12 Обратная транскрипция
2.13 ПЦР в реальном времени
2.14 Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Клиническая характеристика пациентов с ЧРПГ

3.2 Результаты оценки состояния системы «ГЖ-клетка / ИФН 1 типа» у пациентов с ЧРПГ и у здоровых доноров
3.2.1 Оценка влияния ИФН-а на дегрануляцию ГЖ-клеток у здоровых доноров
3.2.2 Оценка влияния ИФН-а на дегрануляцию ГЖ-клеток у пациентов с ЧРПГ
3.2.3 Оценка влияния ИФН-а на цитотоксическую активность ХЖ-клеток (ЕЖ-активность) у здоровых доноров и пациентов с ЧРПГ
3.2.4 Оценка особенностей синтеза ИФН-а мононуклеарными клетками крови в ответ на вирусные индукторы у пациентов с различными вариантами ответа ГЖ-клеток на стимуляцию рекомбинантным ИФН-а
3.2.5 Оценка экспрессии ИФН-индуцибельпых генов с противовирусной функцией ОА81 и Мх1 у пациентов с ЧРПГ и у здоровых доноров
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ЧРПГ помимо стандартного параметра NK-активности, дегрануляцию NK-клеток и отмечают, что как в стадии обострения, так и в стадии ремиссии у пациентов с ЧРПГ умеренно снижена дегрануляция NK-клеток в ответ как на рецепторную, так и на нерецепторную стимуляцию. Достоверное снижение NK-активности имеется только в стадии ремиссии. В стадию обострения, но не в стадию ремиссии, нарушена корреляция между NK-активностыо и процентом NK-клеток, дегранулирующих при взаимодействии с К562. В целом, данные по состоянию NK-клеток при ЧРГ противоречивы.
1.4.3 Современные методы исследования функциональной активности NK-клеток: оценка дегрануляции NK-клеток.
Из рассмотренных выше механизмов цитотоксичности NK-клеток дегрануляция — главный механизм, с помощью которого NK-клетки осуществляют киллерную функцию, поэтому ее исследование необходимо для оценки состояния NK-клеток. Поляризации гранул, т.е. движению литических гранул в зону ИС, является Са-зависимыми и обеспечиваются тубулиновым цитоскелетом (микротрубочками) в направлении активированного LFA-1 [97]. В передаче сигнала с LFA-1 на тубулиновый цитоскелет участвуют белки талин, WASP и CIP-4, устанавливающий связь между WASP и центром организации микротрубочек (ЦОМТ) [80]. Поляризованные гранулы скапливаются непосредственно под ИС у поверхностной мембране NK-клетки [233]. Возможно, в окончательном движении гранул от ЦОМТ к мембране участвуют актиновые филамепты и миозин II [75]. Во взаимодействии гранул с поверхностной мембраной выделяют несколько этапов: прикрепление (docking), подготовку к слиянию (priming) и слияние (fusion). Прикрепление обеспечивается малой ГТФазой Rab27, которая ассоциирована с наружной поверхностью гранул, тогда как в подготовке к слиянию ключевую роль играет белок Muncl3-4 [135]. Интересно, что в покоящихся клетках Rab27 и Muncl3-4 связаны не с гранулами, а, соответственно, с поздними и с рециклизирующимися эндосомами. Слияние Rab27+ и Muncl3-4 везикул с гранулами происходит непосредственно перед