Иммунорегуляторные эффекты опиоидных пептидов у лиц различных возрастных групп

• Автор: Гилёва, Светлана Геннадьевна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Челябинск
• Количество страниц: 103 с. : 13 ил.

оглавление
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1. Возрастные изменения иммунной системы

1.1. Возрастные изменения центральных и периферических лимфоидных органов

1.2. Возрастные изменения врожденного иммунитета

1.3. Возрастные изменения адаптивного иммунитета

1.3.1. Изменения Т-клеточного звена адаптивного иммунитета

1.3.2. Изменения В-клеточного звена адаптивного иммунитета

2. Гендерные различия функционирования иммунной системы

3. Эндогенная опиоидная система
Глава 2. Материалы и методы
Глава 3. Собственные исследования
3.1 Влияние бета-эндорфина и энкефалинов на пролиферативный ответ лимфоцитов мужчин и женщин различных возрастных групп
3.2 Влияние опиоидных пептидов на фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов у доноров мужского и женского пола различного возраста
3.3 Влияние бета-эндорфина на кислородзависимую микробицидную активность лейкоцитов доноров мужского и женского пола различных возрастных
групп
Глава 6. Заключение
Выводы
Список сокращений
Литература

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы исследования и степень ее разработанности.
Опиоидные пептиды являются важными факторами регуляции целого ряда функций и систем организма [45; 249]. Данное семейство биорегуляторов было впервые описано во второй половине 70-х годов XX века [66]. Тогда были выделены и описаны три основных семейства эндогенных опиоидных пептидов: эндорфины, энкефалины и динорфины, образующиеся в результате расщепления крупных молекул-предшественников проопиомеланокортина, проэнкефалина и продинорфина соотвественно. Опиоидные пептиды реализуют свои эффекты через связывание с опиатными рецепторами трех основных типов (ц, 5, к), экспрессия которых на клетках иммунной системы доказана методами радиолигандного связывания и детекции соответствующей РНК [42]. Опиоидные пептиды широко представлены как в ЦНС, так и на периферии. Первоначально продукты расщепления проопиомеланокортина, проэнкефалина и продинорфина были идентифицированы в центральной нервной системе, гипоталамусе, гипофизе. Однако, впоследствии они были обнаружены в эпидермальных клетках различного происхождения, периферических нервных окончаниях, желудочно-кишечном тракте, сердце, легких, щитовидной железе, половых железах, плаценте, в экстрактах тимуса, селезенки и костного мозга, а также в стимулированных и не стимулированных клетках иммунной системы [162;
201; 214]. В очаге воспаления под воздействием антигена или высоких концентраций провоспалительных цитокинов опиоидные пептиды всех семейств продуцируется в непрогнозируемых соотношениях, обусловливая широкий спектр иммунорегуляторных эффектов, реализуемых по пара- и аутокринному механизму и купируя в очаге воспаления боль [234].
Выделение эндогенных опиоидных пептидов в организме носит импульсный характер и наблюдается при различных стрессах, травмах, психоэмоциональных состояниях и физических нагрузках [15, 16, 18; 1,2; 21;
39; 173; 78, 79; 129; 243]. Одним из основных показателей стресса является
повышение содержания бета-эндорфина в плазме крови [111; 128]. В настоящее время известно, что секреция бета-эндорфина, в частности, его продукция лимфоцитами в норме и при стрессе существенно изменяется в течение жизни, при этом изменений его концентрации в периферической крови с возрастом не отмечено [66]. У возрастных субъектов повышена концентрация бета-эндорфина в нестимулированных мононуклеарах периферической крови, и в условиях стимуляции клеток лектинами, концентрация внутриклеточного бета-эндорфина у возрастных субъектов снижается более выражено, нежели у молодых [197]. Помимо этого, в процессе старения организма наблюдаются нарушения механизмов адаптации к внешним воздействиям [25]. Другим важным фактором, определяющим иммунологическую реактивность организма, является пол [141], что, в свою очередь, определяет возникновение и течение различных заболеваний [73], а также различную продолжительность жизни мужчин и женщин [112].
Цель исследования - исследовать влияние эндогенных опиоидных пептидов на отдельные функции клеток врожденного и адаптивного иммунитета у здоровых доноров - добровольцев мужского и женского пола различных возрастных групп.
Задачи исследования
1. Исследовать влияние бета-эндорфина на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови у лиц мужского и женского пола различных возрастных групп.
2. Исследовать влияние мет- и лей-энкефалинов на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови у лиц мужского и женского пола различных возрастных групп.
3. Исследовать влияние бета - эндорфина и энкефалинов на фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови у лиц мужского и женского пола различных возрастных групп.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объект исследования.
Объектом исследования в опытах in vitro служили лейкоциты периферической венозной крови, полученной от соматически здоровых людей - добровольцев 20-59 лет, при отсутствии клинических и лабораторных признаков острого или обострения хронического воспалительного процесса, в условиях процедурного кабинета с соблюдением норм санэпидрежима. У доноров-женщин забор крови производился в первую фазу овуляторного цикла. Все исследования проводились в соответствии с этическими нормами, с согласия доноров-добровольцев после ознакомления их с условиями и задачами эксперимента. Характеристика доноров-дбровольцев по возрасту и полу представлена в таблице 1.
Таблица 1 - Распределение доноров-добровольцев по возрасту и полу
Пол/возраст 20-29 лет 30-39 лет 40-49 лет 50-59 лет
Мужчины 22,1 (п=12) 35,3 (п=9) 45,8 (п=12) 52,5 (п=8)
Женщины 22,8 (п=10) 33,9 (п=11) 44,1 (п=10) 53,9 (п=10)
Всего п=22 п=20 п=22 п
Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови.
В работе был использован модифицированный метод оценки фагоцитоза В.Н. Каплина и сотр. [12]. В качестве объектов фагоцитоза использовались формалинизированные эритроциты барана (ФЭБ), т.к. они имеют более крупные размеры в сравнении с бактериальными клетками, окрашиваются азурэозином в отличие от собственных эритроцитов в синий цвет. Объективность микроскопического учета результатов в данном методе значительно выше. Важно, что фагоцитоз с использованием ФЭБ осуществляется при участии тех же молекул клеточной адгезии и опсонизирующих факторов плазмы, что и естественных объектов, а так же