Особенности постинфекционного и поствакцинального гуморального иммунитета к коклюшу

• Автор: Зайцев, Евгений Михайлович
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 238 с. : 20 ил.

Оглавление

Список используемых сокращений

Введение

Обзор литературы

Глава 1. Эпидемический процесс коклюшной инфекции на современном этапе.

Вакцинопрофилактика коклюша

Глава 2. Факторы патогенности и протективные антигены коклюшного микроба

Глава 3. Серологическая диагностика коклюша. Иммунологический мониторинг эпидемического процесса коклюшной инфекции

Собственные исследования

Материалы и методы

1. Материалы
1.1. Штаммы Bordetella pertussis
1.2. Антигены
1.3. Животные
1.4. Сыворотки животных, пероксидазные коньюгаты сывороток
1.5. Сыворотки людей
2. Методы исследования
2.1. Микробиологические и генотипические методы
2. 2. Получение комплекса антигенов коклюшного микроба
2.3. Получение антисывороток к антигенам В. pertussis
2.4. Иммуноферментный анализ
2.5. Реакция микробной агглютинации
2.6. Реакция пассивной гемагглютинации
2.7. Радиальная иммунодиффузия в геле
2.8. Имуноэлектрофорез
2.9. Гель-фильтрация
2.10. Методы оценки мукозального и системного иммунитетах антигенам В. pertussis у экспериментальных животных

2.11. Оценка протективной активности антигенов В. pertussis
2.12. Определение активности липополисахарида
2.13. Статистические методы
Результаты и обсуждение
Глава 1. Характеристика иммунобиологических свойств вакцинных и свежевыделенных штамов В. pertussis
1.1. Характеристика морфологических, культуральных и генотипических свойств штаммов
1.2. Анализ антигенного состава штаммов вИЭФ
1.3. Исследование антигенных профилей вакцинных и свежевыделенных штаммов коклюшного микроба в ИФА
1.3.1. Разработка и характеристика тест-систем для количественного определения антигенов коклюшного микроба
1.3.2. Исследование антигенного состава штаммов
1.4. Вирулентные свойства штаммов
1.5. Антигенная активность штаммов с сыворотками больных коклюшем и
здоровых привитых АКДС - вакциной детей
Глава 2. Разработка и характеристика тест - систем для выявления антител к антигенам В. pertussis
2.1. Характеристика физико-химических и имунохимических свойств комплекса антигенов В. pertussis
2.1.1. Молекулярные параметры комплекса антигенов
2.1.2. Содержание отдельных компонентов в комплексном препарате антигенов
2.1.3. Иммунохимические свойства комплекса антигенов
2.2. Характеристика иммунохимических свойств отдельных антигенов В. pertussis
2.3. Разработка оптимальных условий проведения ИФА
2.4. Оценка чувствительности и специфичности тест- систем, установление диагностических титров антител к антигенам В. pertussis

2.5. Оценка воспроизводимости тест-систем
Глава 3. Характеристика мукозального и гуморального иммунитета к антигенам В. pertussis на экспериментальной модели
Глава 4. Характеристика гуморального постинфекционного иммунитета к коклюшу
4.1. Титры сывороток больных коклюшем в реакции микробной агглютинации
4. 2. Общая характеристика спектров изотипов и субизотипов антител к антигенам В. pertussis при коклюшной инфекции
4.3. Динамика антител к комплексному антигену В. pertussis у больных коклюшем в разные сроки заболевания
4.3.1. Динамика IgM антител
4.3.2. Динамика IgA антител
4.3.3. Динамика IgG антител
4.3.4. Динамика субизотипов IgG антител
4.3.5. Уровни IgG, IgA и IgM антител у больных коклюшем привитых и непривитых АКДС - вакциной
4.4. Динамика антител к отдельным антигенам В. pertussis
4.4.1. Динамика антител к коклюшному токсину
4.4.2. Динамика антител к филаментозному гемагглютинину
4.4.3. Динамика антител к агглютиногенам
4.4.4. Динамика антител к ЛПС
4.5. Особенности антительного ответа к белковым антигенам и липополисахариду В. pertussis
4.6. Разработка иммуноферментной тест-системы для использования в условиях практического здравоохранения
Глава 5. Характеристика гуморального популяционного противококлюш-ного иммунитета
5.1. Популяционный уровень IgM антител к антигенам В. pertussis

В. pertussis, не экспрессирующих пертактин на перевиваемых клеточных линиях на 30 - 40% ниже, чем у исходных штаммов (234).
Пертактин стимулирует синтез агглютинирующих антител у мышей, защищающих от аэрозольного заражения (298). Пертактин отличается значительным полиморфизмом, особенно в его иммунодоминантных участках (75). С помощью моноклональных антител мыши и сывороток людей в молекуле пертакти-на выявлены 24 эпитопа. При этом только 2 эпитопа распознавались как моноклональными антителами, так и антителами в сыворотках людей. Некоторые из эпитопов взаимодействовали с антителами в сыворотках от 78% до 93% обследованных (183). В молекуле пертактина имеются два вариабельных участка, один из которых граничит с рецептор-связывающим сайтом. В иммунном распознавании важную роль играет N - концевой отдел молекулы (183). Протек-тивный иммунитет к пертактину опосредован как гуморальными, так и клеточными факторами. В N- концевом отделе молекулы пертактина идентифицирован эпитоп, ассоциированный с вовлечением в иммунный ответ CD4+ Т- клеток в ходе инфекционного процесса и вакцинации (303). Имеются достаточно убедительные данные о значении пертактина как протективного антигена. Показано, что наличие антител к пертактину коррелирует с клинической защитой (92). Также отмечено, что бесклеточные вакцины, содержащие пертактин обеспечивают большую защиту, чем вакцины без этого компонента (179, 273).
Фактор колонизации трахеи. Фактор колонизации трахеи является уникальным фактором патогенности, продуцирующийся только штаммами В. pertussis и отсутствующий у других представителей рода Bordetella (128). Фактор колонизации трахеи представляет собой белок с м.м. 64 кДа. С - концевая часть этого белка имеет 50% гомологии с С - концевой частью пертактина. N - концевая часть является уникальной, содержит три аминокислотных участка RGD и имеет 16,5% пролина. Предполагается, что эта структура оказывает влияние на процесс адгезии и колонизации эпителия респираторного тракта. (5). Выделены клинические изоляты В. pertussis, не продуцирующие фактор колонизации трахеи. Необратимое и обратимое отсутствие продукции этого