Влияние факторов острой фазы воспаления на активацию базофилов и тучных клеток человека in vitro

• Автор: Пронина, Анастасия Павловна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 154 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биологически активные вещества, продуцируемые базофилами и 15 тучными клетками: гистамин, лейкотриены, цитокины, хемокины
1.2. Роль цитокинов в дифференцировке, развитии и миграции 16 базофилов и тучных клеток

1.3. Рецепторы базофилов и тучных клеток

1.3.1. РсвШ

1.3.2. Бс8Ш1

1.3.3. Рсу-рецепторы

1.3.3.1ГсуБШВ

1.3.3.2ГсуШП(СВ16)
1.3.4. Другие рецепторы: СВ40Ь, молекулы адгезии
1.4. Факторы врожденного иммунитета и острой фазы воспаления и
их роль в активации базофилов и ТК. Бактериальные и вирусные компоненты и соответствующие рецепторы: ЛПС, То11-рецепторы
1.5. Лектины. Либераторы гистамина. Половые гормоны - индукторы
дегрануляции базофилов и тучных клеток
1.6. Базофилы и компоненты ВИЧ
1.7. Пентраксины: С-реактивный белок и другие вещества - лиганды
Бс-рецепторов
1.8. Факторы комплемента
1.9. Медиаторы автономной холинергической системы
1.10. Выживаемость ТК и базофилов. Регрануляция
1.11. Ранее неизвестные функции базофилов и тучных клеток
1.12. Тучные клетки линии НМС-1
1.13. Методы выделения базофилов и их роль в изучении этих клеток

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Объекты исследования
2.1.1. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови доноров
2.1.2. Получение фракции мононуклеаров, обогащенной базофилами, с помощью негативной селекции и магнитной сепарации
2.1.3. Контроль чистоты базофилов
2.1.4. Культивирование клеток линии НМС-
2.1.5. Окрашивание базофилов, мононуклеаров и тучных клеток
2.2. Активация клеток
2.2.1. Препараты, используемые для активации клеток и оценки степени их активации
2.2.2. Алгоритм активации клеток
2.2.3. Оценка степени активации клеток с помощью количественного определения выделившегося гистамина
2.2.3.1.Определение концентрации гистамина методом Шора
2.2.3.2.0пределение концентрации гистамина иммуноферментным методом
2.3. Оценка экспрессии мембранных маркеров клеток цитофлуориметрическим методом
2.4. Количественная оценка цитокинов в культуральных жидкостях
2.5. Статистические методы
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1.1. Реакции базофилов на СДР, агрегированный 1§С, антитела к РсуДШ (СБ1б), их комбинации
3.1.2. Реакция базофилов крови человека на ЛПС
3.1.3. Реакции базофилов крови человека на агонисты ацетилхолиновых рецепторов
3.1.4. Реакции базофилов на СДР и другие лиганды Бсу-рецепторов при

стимуляции и блокаде ацетилхолиновых рецепторов
3.1.4.1.Реакции базофилов крови человека на СБІР. Влияние блокады никотиновых и мускариновых рецепторов
3.1.4.2.Реакции базофилов крови человека на агрегированный ^С. Влияние блокады никотиновых и мускариновых рецепторов
3.1.5. Сравнение реакций базофилов крови человека на реактанты острой фазы воспаления с реакциями на лигацию Рсє-рецепторов комплексами 1§Е и моноклональных антител к разным эпитопам 1цЕ
3.1.6. Характеристика мононуклеаров по маркерам, в том числе специфичным для базофилов
3.2. Реакции тучных клеток человека линии НМС-1 на факторы острой фазы воспаления (выброс гистамина)
3.2.1. Ответ на неспецифический либератор гистамина вещество 48/
3.2.2. Ответ на лиганды Рсу-рецепторов - С-реактивный белок и агрегированный
3.2.3. Ответ на ЛПС - лиганд рецепторов Т1Л
3.2.4. Реакция тучных клеток человека линии НМС-1 на СЗа
3.2.5. Ответ тучных клеток человека линии НМС-1 на холинергические агенты и их сочетание с лигандами Рсу-рецепторов С-реактивным белком и агрегированным
3.2.6. Характеристика тучных клеток линии НМС-1 по маркерам, специфичным для базофилов
3.3. Сравнительная характеристика ответов базофилов и тучных
клеток человека линии НМС-1 на активацию факторами острой фазы воспаления по выбросу цитокинов
3.3.1. Продукция ІЬ-1 р
3.3.2. Продукция 1Р-
3.3.3. Продукция ЮТ-у

■ 35'
стимулирует их захват макрофагами через Fcy-рецепторы с образованием пенистых югеток — типичного компонента атеросклеротических бляшек [164].
CRP стимулирует образование моноцитами крови ln vitro одного из белков коагуляции - тканевого фактора, и, следовательно, обладает прокоагулянтным эффектом [168, 203].
Связываясь с FcyRl и FcyRII, CRP защищает мышей от летального действия ЛПС. Этот защитный эффект объясняется тем, что под действие CRP усиливается секреция противовоспалительного цитокйна IL-10 и снижается секреция IL-12. Трансгенные по CRP человека мыши резистентны к летальным инфекциям, вызванным Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Salmonella enterica.
Эффекты пентраксинов не ограничиваются защитой от патогенов. Мыши с человеческим трансгеном CRP защищены и от экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ). Инъекция GRP человека или введение трансгена CRP в геном оказывает защитный эффект против GKB-подобного синдрома у предрасположенных к развитию этого заболевания мышей; Защита связана с уменьшением поражения почек за счет снижения депозиции иммунных комплексов [88]. Механизмы протективного действия CRP в этих экспериментальных моделях до конца не изучены.
Действуя на макрофаги через FcyR, CRP изменяет цитокиновый профиль этих клеток, что ведет к сворачиванию воспалительной реакции [152].
Практически ничего не известно о связи базофилов с факторами острой фазы воспаления, в частности с CRP, и о характере влияния CRP на реакции гиперчувствительности немедленного типа. Повышенная экспрессия CRP, пентраксина и известного маркера острой фазы воспаления, сопровождает начало любой формы иммунного ответа [22]. Влияние CRP на функции базофилов и тучных клеток практически не изучено.