НЕЙТРОФИЛЬНЫЕ ВНЕКЛЕТОЧНЫЕ ЛОВУШКИ:МЕХАНИЗМЫ ОБРАЗОВАНИЯ, МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ, БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ

• Автор: Савочкина, Альбина Юрьевна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Челябинск
• Количество страниц: 212 с. : 10 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I Современные представления о нейтрофильных внеклетоных ловушках (Обзор литературы)

1.1. Нейтрофильные гранулоциты и их основные функции

в антимикробной защите

1.2. Нейтрофильные внеклеточные ловушки и их роль в защитных

и патологических реакциях

1.2.1. Состав нейтрофильных внеклеточных ловушек

1.2.2. Механизмы, способствующие выживанию микроорганизмов

в нейтрофильных внеклеточных ловушках
1.2.3. Биологическая роль нейтрофильных внеклеточных ловушек
1.3. Механизмы формирования нейтрофильных внеклеточных ловушек.
1.4.Методы обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек
ГЛАВА II Материалы и методы
2.1. Материалы исследования
2.2. Клинико-лабораторные и инструментальные методы исследования 50 2.3.Забор материала
2.3.1. Получение цельной периферической крови
2.3.2. Получение лейкоцитарной взвеси
2.3.3. Получение чистой фракции нейтрофилов
2.3.4. Получение цервикальной и вагинальной слизи
2.3.5. Получение сыворотки и плазмы
2.3.6. Истощение сыворотки и плазмы крови по комплементу
2.3.7. Истощение сыворотки и плазмы крови по специфическим
иммуноглобулинам
2.4. Методы исследования нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.1 Активация нейтрофилов факторами микробного и немикробного происхождения
2.4.2 Активация нейтрофилов иммунологическими препаратами различной природы
2.4.3. Обнаружение нейтрофильных внеклеточных ловушек при окраске акридиновым оранжевым, Sytox green, по Романовскому-Гимзе
2.4.4. Оценка влияния температуры на формировании нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.5. Оценка влияния времени инкубации на формировании нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.6. Определение участия цитоскелета в формировании нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.7. Определение участия кальциевых каналов в формировании нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.8. Определение участия синтеза белка нейтрофилов в формировании ими внеклеточных ловушек
2.4.9. Влияние мембраностабилизирующих препаратов на формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.10. Изучение влияния сыворотки и плазмы крови на формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.11 Изучение влияния комплемента на образование нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.12 Изучение влияния специфических иммуноглобулинов на образование нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.4.13. Способ определение нейтрофильных внеклеточных ловушек в мукозальных секретах
2.4.14. Определение эффективности и морфологии нейтрофильной внеклеточной ловушки
2.4.15. Способ определение нейтрофильных внеклеточных ловушек в агарозном геле
2.4.16. Способ определение нейтрофильных внеклеточных ловушек на спектрофотометре

2.5. Методы статистической обработки полученных результатов
ГЛАВА III Использование различных способов окраски для идентификации внеклеточных ловушек, образованных нейтрофилами, выделенными из периферической крови
3.1. Определение внеклеточных ловушек, образованных нейтрофилами, выделенными из периферической крови, с использованием акридинового оранжевого
3.2. Определение внеклеточных ловушек, образованных нейтрофилами, выделенными из периферической крови, с использованием красителя Sytox Green
3.3. Определение внеклеточных ловушек, образованных нейтрофилами, выделенными из периферической крови, при окраске по Романовскому-Гимзе
3.4. Сопоставимость различных способов окраски для определения внеклеточных ловушек, образованных нейтрофилами, выделенными из периферической
ГЛАВА IV Влияние температуры, времени инкубации и различных индукторов на формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами, выделенными из периферической крови
4.1. Влияние температурного и временного режимов на формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами, выделенными из периферической крови
4.2. Влияние Candida albicans (штамм 601) и ФМА на формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами, выделенными из периферической крови, в зависимости от температуры и времени инкубации
4.3. Влияние различных микроорганизмов и факторов немикробной природы на формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек

части во внеклеточное пространство при формировании ловушек. Авторы предположили, что возможно, существует взаимосвязь между модификацией аутоантигена и микробными компонентами, и это может увеличивать риск развития аутоиммунных заболеваний [Neeli I. et al., 2008].
Образование НВЛ и, как следствие, антиядерных антител приводит к тяжелым осложнениям у зараженных малярией детей младшего возраста, в то время как у взрослых - это активирует защитные механизмы в борьбе с трехдневной молниеносной малярией. У детей младшего возраста при формировании НВЛ в кровяном русле повышается уровень антинуклеарных ан-тителгантител к ДНК и-к нуклеопротеидному комплексу, что приводит к развитию острых аутоиммунных заболеваний [Baker V.S. et al., 2008]. При малярии, вызванной P. falciparum, циркулирующие НВЛ переносят прилипших паразитов и эритроциты, которые наблюдали во взаимосвязи с антиядерным иммуноглобулином G.
В целом, понимание того, что НВЛ, с одной стороны, могут функционировать как эффективный антимикробный механизм, а с другой -приводить к гемодинамическим расстройствам при неполноценности противодействующих механизмов регуляции, открывает новое направление в исследовании функциональной активности нейтрофилов в норме и при патологии [Zhong X.Y. et al., 2007; Baker V.S. et al., 2008; Neeli I. et al., 2008].
Роль нейтрофильных внеклеточных ловушек, которые формируются при инфекционных, неинфекционных или аутоиммунных заболеваниях, без сомнения, очень важна. Однако, на сегодняшний день, для целого ряда патологических состояний роль НВЛ в патогенезе и иммунологических реакциях остается не ясной.