Роль нейтрофилов в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек

• Автор: Шишкова, Юлия Сергеевна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Челябинск
• Количество страниц: 242 с. : 23 ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение
Глава I. Роль нейтрофилов в поддержании постоянства внутренней среды организма человека (обзор литературы)

1.1. Участие нейтрофилов в поддержании гомеостаза

1.2. Механизмы антимикробной активности нейтрофилов

1.3. Нейтрофильные ловушки

1.4. Нейтрофилы слизистых оболочек и факторы колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин

Глава II. Материалы и методы исследования

2.1. Характеристика обследованных женщин

2.2. Получение исследуемого материала

2.3. Микробиологические методы
2.4. Иммунологические методы исследования
2.5.Биохимические методы исследования
2.6. Методы обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.6.1. Метод выявления нуклеиновых кислот по способу Фельгена
2.6.2. Метод обнаружения нейтрофильных экстрацеллюлярных ловушек при окраске акридиновым оранжевым
2.7. Статистические методы обработки результатов
Глава III. Характеристика лейкоцитарного звена секретов нижнего отдела репродуктивного тракта здоровых женщин в разные фазы менструального цикла
3.1. Определение общего количества лейкоцитов в секретах нижнего отдела репродуктивного тракта здоровых женщин в разные фазы менструального цикла
3.2. Лейкоцитограмма цервикальной слизи и вагинального секрета
3.3. Оценка жизнеспособности лейкоцитов в секретах нижнего отдела репродуктивного тракта здоровых женщин в разные фазы менструального цикла
3.4. Определение показателей функциональной активности нейтрофилов в секретах нижнего отдела репродуктивного тракта здоровых женщин в разные фазы менструального цикла
Глава IV. Определение содержания растворимых антимикробных факторов в секретах нижнего отдела репродуктивного тракта здоровых женщин в разные фазы менструального цикла
4.1. Количественный анализ уровня оксида азота в цервикальном и вагинальном секретах в разные фазы менструального цикла
4.2. Изучение активности лизоцима в цервикальном и вагинальном секретах в разные фазы менструального цикла
4.3. Исследование содержания лактоферрина в цервикальном и
вагинальном секретах в разные фазы менструального цикла
4.4. Определение количества дефенсинов 1-3 в цервикальном и
вагинальном секретах в разные фазы менструального цикла
4.5. Оценка уровня бактерицидного/индуцирующего протеина в цервикальном и вагинальном секретах в разные фазы менструального цикла
4.6. Регистрация активности миелопероксидазы в цервикальном и
вагинальном секретах в разные фазы менструального цикла 1
Глава V. Влияние бактерий на жизнеспособность и функциональный ответ нейтрофилов периферической крови
5.1. Исследование действия Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp. на жизнеспособность нейтрофилов периферической крови
5.2. Исследование фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови по отношению к Е. coll (штамм М-
17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp. и частицам латекса
5.3. Изучение лизосомальной активности нейтрофилов периферической крови после их активации Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp. и частицами латекса
5.4. Оценка внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов периферической крови после активации Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp. и частицами латекса
5.5. Определение содержания антимикробных факторов в супернатантах интактных и активированных взвесью Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp. нейтрофилов
5.6. Определение уровня цитокинов в супернатантах нейтрофилов после взаимодействия с Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp.
Глава VI. Изучение образования внеклеточных ловушек нейтрофилами периферической крови после взаимодействия in vitro с Е. coli, S. aureus, Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp.
6.1. Разработка метода обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек
6.2. Влияние Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp. на формирование нейтрофильных внеклеточных сетей ДНК
6.3. Сравнительный анализ эффективности улавливания бактерий в нейтрофильных внеклеточных сетях и при фагоцитозе
растворение наружного слоя пептидогликанов с превращением грампозитивных бактерий в сферопласты, имеющие низкую осмотическую резистентность. Бактерицидная активность лизоцима связана с его ярко выраженными катионными свойствами, фермент обладает относительной устойчивостью к действию кислот и протеолитических ферментов. Более резистентны к действию лизоцима грамотрицательные бактерии, поскольку их наружная мембрана непроницаема для белка (Теплова C.H., Алексеев Д.А., 2002). Активность лизоцима может быть усилена присутствием лактоферрина, комплемента, антител, которые, повреждая клеточную стенку бактерий, открывают доступ лизоциму к месту его действия (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974; Добротина H.A., Казацкая Ж.А. и др., 1984). Кроме этого, чувствительность бактерий к лизоциму повышают дефенсины, сериновые протеазы и другие компоненты, высвобождающиеся при дегрануляции нейтрофилов внутрь фаголизосом. Лизоцим обладает также антивоспалительной активностью, связанной с мощными антигистаминными эффектами (Теплова C.H., Алексеев Д.А., 2002). Лизоцим человека ингибирует хемотаксис нейтрофилов, продукцию токсических кислородных радикалов (Murphy S., Florman A.L., 1983). Выявлены также новые антивоспалительные эффекты лизоцима, опосредованные модуляцией активности белков системы комплемента (Ogandele М.О., 1998).
Наряду с лизоцимом одним из главных ферментов, разрушающих пептидогликан, является N-ацетил мурам ил-Ь-аланинамидаза,
расщепляющая связи между остатками мурамовой кислоты полисахаридной цепи и L-аланином пептидного мостика (Мазуров Д.В., Львов В.Л. и др., 2001). Этот фермент присутствует в больших количествах в нейтрофилах.
Бактерицидный/индуцирующий протеин (БПИ) является как бы суммарным потенциалом нейтрофильной активности, направленной против определенных чувствительных микроорганизмов, в основном