Выявление новых антикоагулянтов прямого действия в ряду органических соединений различной химической структуры

• Автор: Дрозд, Наталья Николаевна
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 445 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Обзор литературы

Глава I. Регуляция системы свертывания крови антикоагулянтами прямого действия

1.1. Влияние гликозаминогликаиов на активность серпинов

] .2. Связь между структурой сульфатированных

полисахаридов и антикоагулянтной активностью

1.3. Использование концентрата антитромбина для лечения тромботических состояний

1.4. Прямые ингибиторы тромбина

Глава П. Материалы и методы

Собственные исследования
Глава III. Исследование антикоагулянтной активности
сульфатов хитозана
3.1. Влияние нефракционированных сульфатов хитозана с молекулярной массой (ММ) 20-123 кДа и количеством серы 8,8-16,9% на свертывающую систему крови in vitro и ex vivo
3.2. Связь между молекулярной массой, степенью сульфатирования, введением карбоксиметильных групп и антикоагулянтной активностью сульфатов хитозана
3.3. Комплексы сульфатов хитозана с ММ 9-56 кДа
с поликатинами
3.4. Нейтрализация хитозанами с ММ 16 кДа и 21 кДа ингибирования антикоагулянтами амидолитической активности
тромбина и фактора Ха
ГЛАВА IV. Влияние гепаринов с молекулярной массой 1,6-9,0 кДа на свертывание крови in vitro и in vivo
4.1. Антикоагулянтная активность НМГ, полученных
гидролизом нефракционированного гепарина (НФГ) протеолитическим ферментным комплексом препарата Протеаза С
4.2. Фармакодинамические параметры низкомолекулярного гепарина с ММ 5,4 кДа (НМГ- 5,4), полученного с помощью гидролиза НФГ-4 ферментным комплексом Протеаза С
4.3. Антикоагулянтная активность низкомолекулярных гепаринов полученных деполимеризацией нефракционированных гепаринов хитинолитическим ферментным комплексом Streptomycess kurssanovii иммобилизованным на силохроме
4.4. Сравнение эффективности определений активности НМГ против активированного фактора X с помощью наборов “РеаХром-гепарин” (НПО “Ренам") и Berichrom heparin (Dade Behring)
4.5. Фармакодинамические параметры НМГ с ММ 4,7 кДа (НМГ- 4,7), полученного с помощью гидролиза НФГ (Московский эндокринный завод) ферментным комплексом Streptomycess kurssanovii
4.6. Влияние низкомолекулярных гепаринов, полученных с помощью гидролиза НФГ ферментными комплексами Streptomycess kurssanovii (НМГ-4,7) и Протеаза С (НМГ-5,4) на развитие экспериментального тромбоза у крыс и геморрагическую активность
4.7. Антикоагулянтная активность образцов НМГ, полученных деполимеризацией НФГ гидролазами
4.8. Влияние НМГ, полученных деполимеризацией НФГ лизоцимом на свертывание крови in vitro и in vivo
4.9. Влияние НМГ с ММ 7,0 кДа [НМГ-7,0; получен гидролизом НФГ-4) лизоцимом] на свертывание плазмы
кроликов при подкожном введении

4.10. Электрофорез комплексов НМГ - поликатион
4.1 1. Нейтрализация антикоагулянтной активности
образцов НМГ
ГЛАВА V. Влияние натуральных и химически
модифицированных сульфатированных полисахаридов из
морских водорослей на свертывание крови in vitro и in vivo
5.1. Антикоагулянтная активность сульфата альгината
и наноструктур на его основе
5.2. Связь между молекулярной массой фукоиданов из водорослей Fucus evanescens, Laminaria cichorioides и ингибированием активности тромбина/фактора Ха
5.3. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на
агрегацию тромбоцитов человека in vitro
5.4. Нейтрализация антитромбиновой активности фукоиданов in vitro
5.5. Влияние на величину антикоагулянтной активности плазмы при внутривенном введении фукоиданов из водорослей Fucus evanescens и Laminaria cichorioides экспериментальным животным
5.6 Влияние внутривенного введения фукоидана из водоросли Fucus evanescens на активность в плазме кроликов ротеина С и плазминогена
5.7. Противотромботическая и геморрагическая
активности фукоидана из водоросли Fucus evanescens
5.8. Влияние моносахаридного состава фукоиданов из бурых морских водорослей на антикоагулянтную активность
и подвижность комплексов с сульфатом протамина
5.9. Ингибирование активности тромбина и фактора Ха гидролизованными и выделенными хроматографически фракциями фукоиданов из водоросли Laminaria saccharina

сию серпина в печени отвечают Брі- и АР2-связывающие сайты в гене РСІ расположеные на 5'-фланге и действующие как промотор и энхансер [668].
Пептидная последовательность реактивного участка РС1, принимающая участие в связывании представлена Аі^354-8ег355. РС1 ингибирует активность многих аргинин-специфичных сериновых протеиназ включая трипсин, Т (в отсутствии и присутствии тромбомодулина), активированный протеин С, акрозин, калликреин, урокиназу, тканевой активатор плазминогена и фактор Х1а [230-232,253,259,266,270,302,303,356,423,424,483,504,595,593,640, 664,
669]. ГАГ связывающий сайт РСІ локализован не в 0-спирали, как в молекулах АТ и ГК, а в области Н-спирали, с участием П-конца А спирали [182,229,395,518, 644]. Оба домена имеют последовательности остатков аминокислот совместимые с НФГ-связывающей последовательностью. Эксперименты с мутациями четырех остатков в Н-спираль, ГуэЗбб, Аг§269, Ьуз270 и Ьуз273, в рекомбинантном РСІ показали, что эти остатки играют роль при связывании с НФГ. Исследования кристаллической структуры расщепленного РСІ [342] продемонститровали, что в связывании с НФГ или полианионами участвуют другие остатки Н-спирали (А^26, Аі^27, Аі^213, Аі^234, Аі^229, Гуь255 и Аг£362), расположенные рядом с первыми остаками аминокислот. В отличие от АТ и ГК, не очевиден аллостерический механизм активации. Вместо этого предполагают формирование тройного комплекса НФГ - серпин -протеаза [111,426,574]. Так же, как и для других сериновых протеаз с С-карбоксиглутами-новыми кислыми областями, соединение НФГ с РСІ и с активированным протеином С слабое, если нет ионов кальция, для связывания кислой области и предотвращения ее взаимодействия с НФГ-связывающим участком протеиназы [253,593]. НФГ ускоряет РСІ ингибирование Т, в значительно меньшей степени, чем АТ - Г/СГ или ГК/СДР. Более существенная скорость ингибирования активности Т РСІ появляется в результате связывания Т с ТМ, рецепторами эндотелиальных клеток / протеогликанами [230,595,765]. Увеличение скорости ингибирования тромбина РС1 при связывании с ТМ, не включает сульфат хондроитина молекулы ТМ, а скорее всего