Роль эндогенных стволовых и прогениторных клеток в патогенезе пневмофиброза и антифибротическом эффекте резерпина (экспериментальное исследование)

• Автор: Крупин, Вячеслав Андреевич
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 122 с. : 20 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА Е ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Этиология и эпидемиология фиброза легких

1.2. Патогенез фиброза легких (стволовые и прогениторные

клетки)

1.3. Экспериментальные модели для изучения фиброза легких

1.4. Подходы к лечению фиброза легких

1.4.1. Трансплантация легких

1.4.2. Фармакологическая коррекция

1.4.3. Терапия стволовыми клетками

1.5. Эффекты и механизм действия резерпина
1.6. Заключение
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал исследования
2.2. Реагенты
2.3. Экспериментальная модель
2.4. Введение препаратов
2.5. Дизайн исследования
2.6. Методы исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. РЕАКЦИИ КОСТНОМОЗГОВЫХ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ
В КРОВИ И ЛЕГОЧНЫХ МОРФОЛОГИЧЕСКИ РАСПОЗНАВАЕМЫХ, ПРОГЕНИТОРНЫХ И СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА ВВЕДЕНИЕ БЛЕОМИЦИНА
3.1.1. Г исто логическое исследование лёгких
3.1.2. Морфологическое исследование периферической крови и
костного мозга

Изучение поверхностных антигенов прогениторных и стволовых клеток костного мозга, крови и лёгких Клональная активность прогениторных и стволовых клеток костного мозга, крови и лёгких Длительные культуры мононуклеаров лёгких Мультилинейная дифференцировка мезенхимальных стволовых клеток лёгких
ВЛИЯНИЕ РЕЗЕРПИНА НА БЛЕОМИЦИН-ИНДУЦИРОВАННЫЕ НАРУШЕНИЯ В КОСТНОМ МОЗЕЕ, ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ИНТЕРСТИЦИИ ЛЁЕКИХ
Еистологическое исследование легких Морфологическое исследование периферической крови и костного мозга
ВЛИЯНИЕ РЕЗЕРПИНА НА ПРОЕЕНИТОРНЫЕ И СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ В УСЛОВИЯХ ИНТРАТРАХЕ-АЛЬНОЕО ВВЕДЕНИЯ БЛЕОМИЦИНА Иммунофенотипическая характеристика клеток костного мозга и лёгких
Изучение клональной активности прогениторных и стволовых клеток костного мозга, крови и лёгких ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ БСА - бычий сывороточный альбумин
Г-КСФ (М-КСФ, ГМ-КСФ) - гранулоцитарный (макрофагальный, грануло-
цитарно-макрофагальный) колониестимулирующий фактор
ГКС - глюкокортикостероиды
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИЛ - интерлейкин
ИФЛ - идиопатический фиброз легких
КОЕ-Н, -Г, -ГЭММ, -Ф, -Э - колониеобразующая единица недифференцированная, гранулоцитарная, гранулоцито-эритроидно-макрофагально-мегакариоцитарная, фибробластов, эритроидная ЛТ - лейкотриен
ОКЛ - общее количество лейкоцитов ОКК - общее количество кариоцитов ПГ - простагландин РНК - рибонуклеиновая кислота
СК (ВСК, ГСК, МСК, РСК, ТПСК, ЭСК) — стволовые клетки (взрослого организма, гемопоэтические, мезенхимальные, регионарные, тканеспецифичные прогениторные, эмбриональные)
ЭМП - эпителиально-мезенхимальный переход ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка ЭЦМ - экстрацеллюлярный матрикс
AM (adhesion molecule) (ICAM, VCAM) - молекула адгезии (межклеточной, сосудисто-клеточной)
c-Kit - рецептор для фактора стволовых клеток CD (cluster of differentiation) - кластер дифференцировки
DMEM (Dulbecco’s modified Eagle’s medium) - среда Игла в модификации Дульбекко

вич В.Б. и др., 2006; Rojas М., Xu J., Woods C.R. et al., 2005]. За счет активации матриксных металлопротеиназ (MMPs) -2, 9 и подавления функции их ингибиторов, донорские МСК снижают активность воспалительной реакции, секрецию TGF-ß и депонирование коллагена [Chistiakov D.A., 2010]. Недавние исследования Cargnoni А. и соавт. (2012) показали, что кондиционная среда, в которой до этого клонировали МСК, обладает антифибротической активностью [Cargnoni A., Ressel L., Rossi D.et al., 2012]. Считается, что алло-генная и ксеногенная трансплантация МСК не приводит к развитию иммунной реакции «трансплантат против хозяина» [Majumdar М.К., Keane-Moore М., Buyaner D. et al., 2003; Barry F.P., Murphy J.M., O’Brien T. et al., 2005; Otto W.R., Wright N.A., 2011]. Однако следует отметить и другие возможные эффекты трансплантации МСК, такие как эмболия и онкогенез [Togel F., Westenfelder C., 2011].
Гемопоэтические стволовые клетки. Аналогичные результаты были получены при использовании в качестве трансплантационного материала ге-мопоэтических стволовых клеток (ГСК). Так, исследования Krause D.S. и соавт. (2001) показали, что ГСК способны дифференцироваться в альвеоциты I типа [Krause D.S., Theise N.D., Collector M.I. et al., 2001]. В условиях блео-мицинового фиброза легких внутривенное введение ГСК способствует регенерации легочной ткани [Hashimoto N., Jin H., Liu T. et al., 2004; Kotton D.N., Summer R., Fine A., 2004; Kotton D.N., Fabian A.J., Mulligan R.C., 2005]. Исследования Aguilar S. и соавт. (2009) регистрировали сокращение экспрессии TNF-a, CCL-2, 9 и увеличение митогенной активности альвеоцитов в легких блеомициновых мышей после трансплантации ГСК [Aguilar S., Scot-ton С J., McNulty K. et al., 2009].
Тканеспецифичные прогениторные стволовые клетки. Считается, что роль тканеспецифических прогениторных стволовых клеток (ТПСК) могут выполнять кубоидальные клетки II типа, способные делиться и восполнять количество альвеоцитов I типа [Mason R.J., Williams М.С., 1977; Brody J.S, Williams M.C., 1992]. Появились данные, указывающие на возможность кле-