Факторы дисфункции дендритных клеток при туберкулезе легких

• Автор: Дитто, Зульфия Каримкулловна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 113 с. : 5 ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение

Г лава 1. Обзор литературы

1.1. Современный взгляд на происхождение дендритных клеток

Л..2. Факторы.активации_и_функции_дёндритных_клеток

1.3. Рецепторный аппарат дендритных клеток

1.4. Участие дендритных клеток в формировании иммунологической 29 толерантности

1.5. Роль дендритных клеток в распознавании микобактерий туберкулеза

1.6. Нарушение процессов активации дендритных клеток при туберкулезе 34 легких

Глава 2. Материал и методы исследований
2.1. Объект исследования
2.2. Материал исследования
2.3. Методы исследования
2.3.1. Выделение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови
2.3.2. Выделение моноцитов из взвеси мононуклеарных лейкоцитов путем 42 градиентного центрифугирования
2.3.3. Трансформация моноцитов в дендритные клетки
2.3.4. Определение поверхностных маркеров СО80, СБ86, СБ-209, НЬА- 44 ОЯ. и ТГЯ2 на дендритных клетках с использованием моноклональных антител методом проточной цитометрии
2.3.5. Оценка секреторной активности дендритных клеток
2.3.5.1. Измерение концентрации 1Ь-18 в супернатантах культуральных 46 суспензий дендритных клеток
2.3.5.2. Измерение концентрации 1Ь-12 в супернатантах культуральных 47 суспензий дендритных клеток
2.3.6. Приготовление ядерных лизатов дендритных клеток для определения 48 содержания внутриклеточного транскрипционного фактора ИР-кВ
2.3.7. Определение содержания внутриклеточного транскрипционного 48 фактора №-кВ в ядерных лизатах дендритных клеток
2.4. Статистический анализ результатов исследования
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Количественные параметры периферической крови и культуральных
суспензий у больных туберкулезом легких
3.1.1. Количественные параметры периферической крови и культуральных 51 суспензий у больных туберкулезом легких в зависимости от клинической формы заболевания
3.1.2. Количественные параметры периферической крови и культуральных 53 суспензий у больных туберкулезом легких в зависимости от варианта заболевания (лекарственно-чувствительный/лекарственно-устойчивый)
3.1.3. Количественные параметры периферической крови и культуральных 54 суспензий у больных с лекарственно-устойчивым туберкулезом легких в зависимости от спектра лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis
3.2. Характеристика рецепторного аппарата дендритных клеток у больных 56 туберкулезом легких
3.2.1. Характеристика рецепторного аппарата дендритных клеток у 56 больных туберкулезом легких в зависимости от клинической формы заболевания
3.2.2. Характеристика рецепторного аппарата дендритных клеток у 57 больных туберкулезом легких в зависимости от варианта заболевания
(лекарственно-чувствительный/лекарственно-устойчивый)
3.2.3. Характеристика рецепторного аппарата дендритных клеток у 59 больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких в зависимости от спектра лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis
3.3. Концентрация цитокинов в супернатантах культуральных суспензий 61 дендритных клеток у больных туберкулезом легких
3.3.1. Концентрация цитокинов в супернатантах культуральных суспензии 61 дендритных клеток у больных туберкулезом легких в зависимости от клинической формы заболевания
3.3.2. Концентрация цитокинов в супернатантах культуральных суспензии 62 пендоитных клеток у больных туберкулезом легких в зависимости от
варианта заболевания (лекатвеню-чувствтелышлекарствгеннб5“ устойчивый)
3.3.3. Концентрация цитокинов в супернатантах культуральных суспензии 63 дендритных клеток у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом в зависимости от спектра лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis
3.4. Концентрация внутриклеточного транскрипционного фактора NF-kB в 64 лизатах дендритных клеток у больных туберкулезом легких
3.4.1. Концентрация внутриклеточного транскрипционного фактора NF-kB 64 в лизатах дендритных клеток у больных туберкулезом легких в зависимости от клинической формы заболевания
3.4.2. Концентрация внутриклеточного транскрипционного фактора NF-kB 64 в лизатах дендритных клеток у больных туберкулезом легких в зависимости от варианта заболевания (лекарственно-
чувствительный/лекарственно-устойчивый)
3.4.3. Концентрация внутриклеточного транскрипционного фактора NF-kB 65 в лизатах дендритных клеток у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом в зависимости от спектра лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis
Глава 4 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Выводы

Список литературы

проведенные исследования показали, что при TJ1 имеет место снижение секреции IL-12 [Хасанова P.P. и соавт., 2008; Воронкова О.В. и соавт., 2010]. Недостаточный уровень секреции данного цитокина может лежать в основе Т-клеточного дефицита, характерного для туберкулезной инфекции. IL-12 и IL-18 обладают синергичным влиянием на Т-лимфоциты. Показано, что для адекватной продукции IFNy NK- и цитотоксическими Т-клетками требуется одновременное действие обоих цитокинов [Кетлинский С.А., 2005; Якушенко Е.В. и соавт., 2005].
В работе Е.Г. Чуриной и соавт. [2012] показано увеличение базальной и BCG-индуцированной секреции IL-10 Т-лимфоцитами с фенотипом CD4+CD25+Foxp3+ у больных инфильтративным TJI, что, возможно, также подавляет антигенпрезентирующие способности у «вновь прибывших» в очаг воспаления ДК. Повышение числа Т-лимфоцитов с фенотипом CD4+CD25+Foxp3+ происходит в тимусе под влиянием ДК и свидетельствует об активации механизмов иммуносупрессии при TJI.
Из данных литературы следует, что антигены микобактерий туберкулеза способны распознаваться лектиновым рецептором С-типа DC-SING, экспрессируемым на поверхности ДК. Такое взаимодействие приводит к усилению секреции иммуносупрессорного цитокина IL-10, подавлению созревания и активации ДК, что в итоге опосредует выживание микобактерий и формирование новых ниш для распространения возбудителя. Данный рецептор распознает полисахаридные компоненты микобактериальной клеточной стенки и, скорее всего, необходим для компенсации ярко выраженной воспалительной реакции [Hickman S.P. et al., 2006].
Предполагается, что клеточная ТЫ-реакция формируется в результате быстрой секреции ДК IL-12, а последующая продукция IL-10 не способна модулировать иммунный ответ. Однако ДК, секретирующие IL-10, формируют реакцию иммунного Th2-ответа либо толерантности. Таким образом, актуальным является вопрос о кинетике продукции цитокинов в ходе иммунного ответа при туберкулезной инфекции [Hickman S.P. et al., 2006].