Антитела к нейромедиаторам при болевых и психоэмоциональных стресс-синдромах

• Автор: Захарова, Ирина Александровна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Иммунологические методы

1. Методика синтеза конъюгированных антигенов нейромедиатор-белок

2. Методика получения антител к нейромедиаторам

3. Методика выявления антител к нейромедиаторам в сыворотках крови людей и экспериментальных животных

2.2.Методика иммунизации животных

1. Активная иммунизация
2. Пассивная иммунизация
а) Системное введение АТ к ГЛУ
б) Интраназальное введение АТ к ГЛУ
2.3. Экспериментальные модели
1. Методика моделирования нейропатического болевого синдрома
2. Методика моделирования психоэмоционального стресса
2.4. Изучение поведенческой активности животных
1. Тестирование крыс в открытом поле
2. Тестирование мышей в открытом поле
3. Тестирование мышей в «темно-светлой» камере
4. Выработка и сохранение условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ)
5. Методика определения болевой чувствительности
2.5. Изучение состояния органов-маркеров стресса
2.6. Статистическая обработка данных

Глава 3. АУТОАНТИТЕЛА К НЕЙРОМЕДИАТОРАМ ПРИ БОЛЕВЫХ И ПСИХОЭМОЦИОНАЛЬНЫХ СТРЕССОРНЫХ СИНДРОМАХ
3.1. Аутоантитела к нейромедиаторам при стресс-реакциях, сопутствующих экспериментальному болевому синдрому
3.2. Аутоантитела к нейромедиаторам при экспериментальном психоэмоциональном стрессе
3.3. Аутоантитела к нейромедиаторам у больных с хроническим болевым
синдромом при остеохондрозе поясничного отдела позвоночника
Глава 4. ВЛИЯНИЕ АНТИТЕЛ К ГЛУТАМАТУ И ГАММА-АМИНОМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЕ НА РАЗВИТИЕ СТРЕССОРНЫХ РЕАКЦИЙ У МЫШЕЙ С57ВЬ/6 ПРИ ИММУНИЗАЦИИ КОНЪЮГАТАМИ НЕЙРОМЕДИАТОР-БЕЛОК
4.1. Влияние повторных аппликаций физиологического раствора на поведение в открытом поле и болевую чувствительность мышей С57В1/6
4.2. Влияние антител к глутамату и ГАМК при активной иммунизации на посгстрессорные поведенческие реакции в тесте «Открытое поле» и болевую чувствительность животных
4.3. Влияние антител к глутамату и ГАМК при активной иммунизации на посгстрессорные поведенческие реакции в тесте «Темно-светлая камера»
и болевую чувствительность животных
4.4. Влияние антител к глутамату и ГАМК при активной иммунизации на выработку и сохранение условного рефлекса пассивного избегания
(УРПИ)
Глава 5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПОДХОДЫ К ИММУНОКОРРЕКЦИИ СТРЕСС-ИНДУЦИРОВАННЫХ
НАРУШЕНИЙ С ПОМОЩЬЮ АНТИТЕЛ К ГЛУТАМАТУ
5.1. Иммунопрофилактика постстрессорных нарушений
5.1.1. Влияние АТ к ГЛУ при предварительном внутрибрюшинном введении на развитие стресс-синдрома у мышей С57В1/6
5.1.2. Влияние АТ к ГЛУ при предварительном внутримышечном введении на развитие стресс-синдрома у мышей С57В1/6
5.1.3. Влияние АТ к ГЛУ при предварительном интраназальном введении
на развитие психоэмоционального стресса у мышей С57В1/6
5.2. Иммунотерапия постстрессорных нарушений
5.2.1. Влияние АТ к ГЛУ при интраназальном введении сразу после стрессорного воздействия
5.2.2. Дозозависимые эффекты АТ к ГЛУ при интраназальном введении
сразу после стресса на развитие стресс-реакций
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

2. Методика получения антител к нейромедиаторам Антитела к нейромедиаторам получали путем гипериммунизации кроликов соответствующим конъюгированным антигеном. Титры антител в сыворотке крови иммунизированных животных достигали 1:1000 -1:2000. Антитела в виде гамма-глобулиновых фракций выделяли из сыворотки крови методом переосаждения сульфатом аммония, очищали путем диализа, лиофилизировали и хранили при 4°С. Аналогичным образом выделяли и гамма-глобулиновую фракцию у интактных (неиммунизированных) кроликов.
Очистку АТ к НМ от антител к белку-носителю проводили методом аффинной хроматографии. Активированную бромциаиом сефарозу 4В (5г), растворенную в дистиллированной воде, наносили на хроматографическую колонку и промывали 0,001М раствором НС1, забуференным физиологическим раствором (0,15М NaCl; 0,15М КН2 Р04; 0,15М Na2HP04x2H20), 0,1М раствором NaHC03. Затем 50 мг БСА растворяли в 5 мл 0,3M NaHC03 и наносили по каплям на колонку с сефарозой. Далее промывали полученный иммуносорбент от несвязавшегося белка забуференным физиологическим раствором до нулевой экстинкции элюата при 280 нм. АТ к НМ (50 мг по белку) растворяли в 5 мл забуференного физиологического раствора и наносили по каплям на колонку. Через сутки смывали очищенные антитела забуференным физиологическим раствором, промеряя оптическую плотность каждой фракции при 280 нм.
3. Методика выявления антител к нейромедиаторам в сыворотках крови людей и экспериментальных животных
Сыворотку крови больных остеохондрозом позвоночника получали в отделении патологии позвоночника (заведующий - профессор, д.м.н. С.Т. Ветрилэ) Центрального научно-исследовательского института травматологии и ортопедии (ЦИТО) им. H.H. Приорова. В качестве контроля была исследована сыворотка крови 43 доноров в среднем того же возраста, что и больные. Сыворотка крови доноров была получена из отделения заготовки и