Саногенез печеночной недостаточности под влиянием ксенотрансплантации клеток печени и селезенки : экспериментальное исследование

• Автор: Лепехова, Светлана Александровна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 278 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. САНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИИ КЛЕТОК ПРИ ОСТРОЙ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. Механизмы повреждения печени при моделеровании острой печеночной недостаточности различного генеза
1.2. Использование клеточной трансплантации для корреции острой печеночной недостаточности различного генеза
1.3. Критерии эффекшвиости клс гочной коррекции печеночной недостаточности различного генеза

1.4. Способы подготовки клеточного материала для трансплантации* ..

1.5. Механизмы саногенеза ОПН трансплантацией клеток. Роль фактора роста гепатоцитов в пато- и саногенезе печеночной недостаточности различного генеза

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика экспериментального материала in vitro
2.2. Общая характеристика экспериментального материала in vivo
2.3. Характеристика методов исследования
2.4. Методы лабораторных исследований
2.5. Методы статистической обработки результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ РАЗРАБОТКИ ТЕХНОЛОГИИ ВЫДЕЛЕНИЯ, КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И КРИОКОНСЕРВАЦИИ КЛЕТОЧНОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИИ
3.1. Результаты получения эмбриональных клеток печени свиньи
для ксенотрансплантации
3.2. Результаты.получения неонатальных клеток печени новорожденной свиньи для ксенотрансплантации
3.3. Результаты получения неонатальных клеток селезенки новорожденной свиньи для ксенотрансплантации
3.3. Результаты морфологической оценки ксенотрансплантатов
на моделях острой печеночной недостаточности

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕХАНИЗМОВ САНОГЕ-НЕЗА ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ОСТРОМ ТОКСИЧЕСКОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ПЕЧЕНИ ПОД ВЛИЯНИЕМ КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИИ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ
ГЛАВА 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ САНОГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕХАНИЗМОВ ПОСТРЕЗЕКЦИОННОЙ ОПН ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИИ КЛЕТОК
5.1. Эффекты КТ клеток при 70% резекции печени
5.2. Эффекты КТ клеток печени при 90% резекции печени
ГЛАВА 6. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕХАНИЗМОВ САНОГЕ-НЕЗА ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ НА ФОНЕ АСПЛЕНИЗАЦИИ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИИ КЛЕТОК
6.1. Г Роль аспленизации в патогенезе печеночной недостаточности
6.2. Механизмы саногенеза воспалительного повреждения печени, вызванного аспленизацией в условиях ксенотрансплантации кле- '
ток и введения экзогенного HGF
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЛТ - аланинаминотрансфераза
АСТ - аспартатаминотрансфераза
ВПП - воспалительное повреждение печени
ггта — гаммаглутамилтранспептидаза
гц - гепатоцит
ГЭР - гранулярный эндоплазматический ретикулум
РІГ - изолированные гспатоциты
КТ - ксенотрансплантацпя
кк - клетки Купфера
ккп - культура эмбриональных криоконсервированных клеток печени
ккс - культура неонатальных криоконсервированных клеток селезенки
ЛАП - лейцинаминопептидаза
лдг - лактатдегидрогеназа
ми - митотический индекс
нг - криоконсервированные изолированные неонатальные гепатоциты
нкс - криоконсервированные неонатальные клетки селезенки
ОАК — общий анализ крови
опн - острая печеночная недостаточность
отп - острое токсическое повреждение печени
пн - печеночная недостаточность
ппн - пострезекционная острая печеночная недостаточность
ск - стволовые клетки
СЭ - спленэктомия
тгц - трансплантация гепатоцитов
ХЭ - холинэстераза
цик — циркулирующие иммунные комплексы
ЧХУ - четыреххлористый углерод
Э - эндотелиоциты
ЭР — эндоплазматический ретикулум
НОР - фактор роста гепатоцитов
Таблица 2.
Общая характеристика выполненных экспериментов in vitro, n =
Цель опыта Группа № Характеристика материала Кол-во образцов Контролируемые показатели Клетки
печени селезенки
Разработка эффективного метода выделения клеток 1.1 Ферментативный м-д дезагрегации 21 Жизнеспособность клеток (%), Кол-во клеток, полученных из 1 г ткани печени (х108) +
1.2 Механический м-д дезагрегации 21 +
1 3 Разработанный* 21 +
1.4 Механический м-д дезагрегации 25 +
1.5 Ферментативный м-д дезагрегации 25 +
1.6 Разработанный 25 +
Подбор рациональных условий) для культивирования клеток. 2.1 Заданная величина pH-7,2 71 pH среды, Жизнеспособность клеток (%), МИ*, кол-во НСИ* и альбумина** в среде, гистологическое исследование**, цитологическое исследование*** +
2 2 7,4 55 +
2 3 7,6 180 +
2.4 7,8 30 +
2.5 6,8 8 +
2.6 7,0 8 +
2.7 7,2 8 +
2.8 7,4 8 +
2 9 7,6 128 +
2 10 7,8 8 +
2.11 8,0 8 +
2.12 8,2 8 +
Разработка эффективного метода криоконсервирования клеток 3.1 Криопротектор ДМСО 45 pH среды, Жизнеспособность клеток (%), гистологическое исследование**, цитологическое исследование*** +
3.2 Криопротекгор по-ливинипирролидон 15 +
3.3 Оригинальная среда 69 +
34 Криопротектор ДМСО 74 +
3.5 Оригинальная среда 109 +
* - показатели, проанализированные в образцах полученных по оригинальной технологии с pH растворов 7,6 (2.3; 2.9);** - показатель анализирован в образцах клеток печени, *** - показатель анализирован в образцах клеток селезенки
В первой серии стендовых экспериментов (п= 138) на основании известных методов [61,72, 95, 165] разрабатывали способ забора, дезагрегации печени и селезенки.
Эффективность технологий оценивали по известным критериям — жизнеспособность и относительное количество клеточного материала, получаемое из единицы массы донорской ткани [127].