Эпителио-мезенхимальная пластичность мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в норме и патологии (экспериментальное исследовние)

• Автор: Сабурина, Ирина Николаевна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 195 с. : 66 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Регенерация: основные понятия, процессы и концепции

1.2. Регенерация тканей и стволовые клетки

1.2.1. Эмбриональные стволовые клетки

1.2.2. Региональные стволовые клетки

1.2.3. Научно - практическое применение РСК

1.2.4. Костный мозг как источник РСК

1.2.5. Характеристика мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга
1.3. Многоклеточные модули бактерий: происхождение
стволовых клеток
1.4. Изучение пластичности стволовых и соматических клеток
в 2-D/ 3-D культуре
1.4.1. Сфероиды из переживающих мини-эксплантатов фетальной и взрослой ткани
1.4.2. Сфероиды из диссоциированных клеток тканей и органов в 3D культуре
1.4.3. Сфероиды из ЭСК в 3D культуре
1.4.4. Эпителио-мезенхимальная конверсия в 3D культурах
1.4.5. Сфероиды из мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Выделение, культивирование и исследование 2D культур in
vitro
2.2. Культивирование мини-эксплантатов тканей
2.3. 3D культивирование ММСК, СКЖТ и СКПК

2.4. Исследование поведения ММСК и НСПК после инъекции в органотипическую культуру сетчатки
2.5. Экспериментальные исследования на животных
2.5.1. Трасплантация ММСК крысам с моделью пигментной дегенерации сетчатки
2.5.2.Трансплантация МВ и ММСК в скелетные мышцы мышей

2.5.3. Трансплантация НСПК и ММСК крысам с ишемическим повреждением головного мозга
2.5.4. Трансплантация ММСК мышам с модельным стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Характеристика первичных клеточных культур
3.1.1. 20 культура стромальных клеток жировой ткани (СКЖТ)
3.1.2. 20 культура стромальных клеток пупочного канатика (СКПК)
3.1.3. 20 культура миобластов человека (МБ)
3.1.4. 20 культура нейральных стволовых/прогениторных клеток (НСПК)
3.1.5. Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки костного мозга (ММСК)
3.2. Эпителио-мезенхимальная пластичность 20 культуры ММСК
3.3. 30 культивирование миниэксплантатов пренатальных и дефинитивных тканей
3.3.1. Образование сфероидов в культуре миниэксплантатов головного мозга
3.3.2. Образование энтеросфероидов из миниэксплантатов мукозы тонкого кишечника

3.3.3. Образование сфероидов из миниэксплантов сетчатки
3.3.4. Обрзование сфероидов из миниэксплантов скелетных

3.4. 3D культивирование диссоциированных первичных культур СКЖТ, СКПК, МБ и ММСК
3.5. Исследование поведения ММСК и НСПК при инъекции в органотипическую культуру сетчатки
3.6. Трансплантация ММСК животным с экспериментальной патологией
3.6.1. Трасплантация ММСК крысам с моделью пигментной дегенерации сетчатки
3.6.2. Трансплантация ММСК и НСПК в мозг крыс с моделью локальной ишемии головного мозга
3.6.3. Трансплантация ММСК и MB животным в поврежденную мышечную ткань
3.6.4. Трансплантация ММСК животным с стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7. ПРИЛОЖЕНИЕ

CD 10 - CALLA (common acute Lymphocytic leukemia antigen), маркер ранних предшественников лимфоидной ткани человека [337], CD 13 -аминопептидаза N, обнаружен на моноцитах и коммитированных предшественниках миелоидной линии [337], CD29 - интегрин-ßl [401]и CD44 - Pgp 1 (phagocytic glycoprotein-l/hyaluronate receptor) [272], стойкая-экспрессия которых недифференцированными ММСК костного мозга человека подтверждена в многочисленных исследованиях различными! научными группами[161, 174, 180, 211, 340].
При фенотипировании ММСК кроме подбора новых антител исследователи стали использовать уже известные антитела, первоначально полученные для других типов клеток [64, 78, 95, 264].
Сравнительно недавно обнаружены дополнительные поверхностные белки ММСК: SSEA-1 [stage specific embryonic antigen) и SSEA-4. Считалось, что данные белки являются специфичными маркерами человеческих эмбриональных стволовых клеток на ранних стадиях дробления бластоцисты.
При помощи SSEA-1 была идентифицирована, изолирована и описана малая субпопуляция примитивных прогениторных клеток в костном мозге взрослых мышей. В работе F. Anjos-Afonso и соавт. [64] установлено, что популяция клеток, экспрессирующих эмбриональный антиген SSEA-1 , может быть идентифицирована при помощи антител к SSEA-1 не только в культуре, но и непосредственно в костном мозге. Это подтверждает существование их in vivo. Также при культивировании SSEA-1 позитивных клеток отмечено, что они дают начало популяции SSEA-1- клеток, в то время как обратного явления не наблюдалось. Клетки, экспрессировавшие SSEA-1, имели большую способность к дифференцировке in vitro не только в мезенхимальном направлении, но и в неортодоксальные для ММСК типы клеток: астроцито-, гепатоцито- и эндотелиоподобные клетки, приобретая при этом некоторые их свойства. Кариотип клеток в то же время оставался нормальным. SSEA-