Морфологические изменения органов лабораторных животных при длительном пероральном введении золотых наночастиц

• Автор: Пахомий, Светлана Сергеевна
• Шифр специальности: 14.03.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 112 с. : 37 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1Л. Нано1ехноло1 ии и нанома1ериалы. Понятие о наночастицах и нанома1сриалах

1.2. Нанотехнологии в медицине

1.3. Золото и нанотехнологии. Биомедицинское применение золотых наночас гиц

1.4. Токсичность напомаюриалов

Глава 2. Материалы и методы исследования

Глава 3. Морфологические изменения в органах лабораторных животных при

длительном пероральном введении золотых напочастиц

3.1. Морфологические изменения в желудочно-кишечном тракте

3.2. Морфоло1 ические изменения в печени
3.3. Морфологические изменения в сердце
3.4. Морфологические изменения в легких
3.5. Морфологические изменения в селезенке
3.6. Морфологические изменения в почках
3.7. Морфологические изменения в головном М031С
Заключение
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
ВВЕДЕНИЕ Ак1уалыюс1 ь проблемы
В последнее время все больше исследований в области нанотехнологий направлены на решение задач практической медицины. Предполагается, что в ближайшем будущем использование наномагериалов приведет к революционным дос1ижениям в лечении мно1их заболеваний. Уже сегодня коллоидное золото применяют в качестве носителя для доставки лекарственных веществ, I енегического материала, антигенов и как собственно лекарственное или диа1 ностическое средщво при терапии опухолей или рсвмаюидно] о ар I ри 1а (КЫсЫзоу N.0., Оуктап [_.А., 201 1).
Однако практически одновременно с началом медицинских применений наноматериалов возникли острые вопросы по поводу их возможного потенциалы-101 о юксического дсйствия на клетки и ткани живых организмов. Несмотря на то, что наноматериалы в мире уже используются более 10 лет, ни один вид наночастиц не был изучен в полном объеме на безопасность пи в одной из стран мира (Онищенко Г.Г., 2007). Анализ современных данных показывает, что с одной стороны, на базе научных разработок появляются новые «прорывные» технологии и материалы, с другой сюроны, активное разните нанотехнологий может привести к появлению нового класса соединений, оказывающих токсическое влияние на организм человека и животных.
Учитывая, что в перспективе ожидается тесный контакт человека и других биологических обьсктов с наиоматсриалами изучение вопросов потенциальных рисков их использования представляется первостепенной задачей (Онищенко Г.Г., 2007). Именно поэтому в специальной литературе последних 4-5 лет особое внимание уделяется вопросам биораспределения и токсичности наноматериалов. В частности, безопасное применение ЗНЧ невозможно без решения вопросов их потенциальной токсичности с учетом размеров, длительности и способов введения. Особое значение в этом аспекте имеет определение характера и выраженности повреждающего

влияния ЗНЧ па организм лабораюрпых живошых с обязательным морфологическим исследованием внутренних органов. Это обусловлено тем, что оценка морфологического соеюяпия органов, в первую очередь ответственных за метаболизм и дкскрецию, непосредственно после окончания введения исследуемого вещества позволяет визуально оценить патоло1 ические изменения в сфук1уре ор]ана и охаракщризовать их количественно (Хабриев Р.У., 2005). Кроме тою, изучение морфологического строения внутренних орюнов через определенный период времени после окончания введения вещее 1ва с определением тех же показателей дает возможное суди1ь об обратимости выявленной паюлогии.
До настоящею времени анализ морфологических изменений и их обратимость во внутренних орюнах лабораторных животных, возникающих в ответ на увеличение длительности пероральпого введения ЗНЧ разного размера, не проводился. Перечисленные и нерешенные задачи, связанные с оценкой воздействия размерных эффектов ЗНЧ па организм лабораторных животных, определили актуальность и целесообразность выполнения настоящего исследования.
Цель исследования
Оценить выраженность и обратимость морфологических изменений в органах лабораюрпых животных при длительном пероральном введении золотых наночас 1ип разною размера.
Основные задачи исследования:
1. Изучигь влияние размера перорально вводимых золотых наночасгиц на морфологическое строение ор1 апов лабораюрпых живошых.
2. Провести сравнительный анализ морфологических изменений в органах лабораторных животных при различных сроках введения золотых наночастиц размерами 1-3, 15 и 50 нм и выявить органы-мишени, характерные для поражения золотыми наночас гицами определенного размера.
являе!ся ядсрным белком, коюрый экспрессируется во всех фазах митотического цикла (Gl, S, G2 В М-фазах), кроме фазы покоя (GO) (Ross J.S., 1996; Oijen M. el al. 1998). Во время интерфазы антиген определяется исключительно в ядре, в го время как в стадию митоза большее количество белка перемещается па поверхность хромосом.
Для иммунот ис! охи ми чес KOI о исследования (ИГХ) парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм помещали на поли-Ь-лизиновые с телка и высушивали при температуре 37°С в течение суток. Иммуногисюхимическое исследование проводили в 4 этапа.
I этап. Дспарафинировапие и pei идра1ация.
II этап. Демаскировка ашигенов Препараты обрабатывали 5 мин в 3% перекиси водорода, затем отмывали в PBS-буфере 5 мин. Демаскировку клеточных ашигенов, осуществляли путем натревания с целыо усиления иммуногистохимической реакции на срезах, фиксированных в формалине. Препараты погружали в буфер-конценграт (Target retrieval solution, рН=9, Dako) и помещали в микроволновую печь. Устанавливали мощность и время обработки — дважды 560 Вт по 5 мин с интервалами между циклами
1-2 мин. Далее нагревали при мощности 280 Вт в течение 20 мин. После окончания обработки препараты остывали при комнатой температуре не менее 15-20 мин. Стекла ополаскивали в двух порциях дистиллированной воды, затем 5 мин в буфере (Ths buffered saline, Dako).
III этан Проведение иммуногистохимической реакции. Удалив избыток буфера, наносили первичные атниюла (Anti-Ki67, Abeam), разведенные 1100 в Antibody diluent и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Промывали 3 раза в буфере (Tris buffered saline, Dako). Наносили на срезы Mouse Specifying Reagent и инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин Промывали 2 раза в буфере (Tris buffered saline, Dako) Наносили на срезы Goat anti-rabbit HRP и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин. Промывали 4 раза в буфере (Tris buffered saline, Dako). Наносили раствор DAB (20pl DAB