Разработка методических приемов повышения гигиенической надежности санитарно-бактериологических методов анализа воды

• Автор: Буторина, Наталия Николаевна
• Шифр специальности: 14.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 217 с. : ил.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Основы эпидемической безопасности питьевого водопользования
1.2. Современные принципы определения колиформных бактерий в воде
1.3. Методы определения оксидазной активности бактерий
1.4. Методические подходы к определению спор сульфитредуцирующих клостридий
1.5. Адаптационная изменчивость свойств бактерий в процессе обеззараживания воды
1.6. Факторы, вызывающие временное снижение жизнеспособности микроорганизмов
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Модельные микроорганизмы и показатели
2.2. Материалы и объекты исследований
2.3. Реактивы, питательные среды
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА УСКОРЕННОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ НА ОСНОВЕ ЭКСПРЕССНОГО ТЕСТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ
3.1. Оценка степени бактерицидности оксидазных реактивов в отношении
оксидазоотрицательных и оксидазоположительных бактерий
3.2. Влияние оксидазных реактивов ТМ и ДМ на жизнеспособность и биохимическую активность Escherichia coli
3.3. Разработка методических приемов по снижению влияния реактива ДМ на биохимическую активность бактерий Escherichia coli
3.4. Влияние компонентов оксидазного реактива ДМ на биохимическую активность бактерий Escherichia coli
3.5. Влияние питательной среды, на которой выросли бактерии Escherichia coli, на скорость ферментации лактозы после контакта с оксидазными реактивами

ГЛАВА 4. ВАЛИДИЗАЦИЯ УСКОРЕННЫХ МЕТОДОВ ИНДИКАЦИИ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭКСПРЕССНОГО
ТЕСТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ
ГЛАВА 5. МОДИФИКАЦИЯ УСКОРЕННОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI НА ОСНОВЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ
ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ
ГЛАВА 6. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ИНДИКАЦИИ СПОР СУЛЬФИТРЕДУЦИРУЮЩИХ КЛОСТРИДИЙ В ВОДЕ УСЛОВИЯХ
ОБЫЧНОГО ТЕРМРСТАТИРОВАНИЯ
ГЛАВА 7. РАЗРАБОТКА МЕТОДИЧЕСКИХ ПРИЕМОВ ПОВЫШЕНИЯ ГИГИЕНИЧЕСКОЙ НАДЕЖНОСТИ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОЦЕССОВ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ВОДЫ
7.1. Изучение возможности реактивации бактерий в процессе
обеззараживания речной воды гипохлоритом натрия и диоксидом хлора
7.2. Изучение возможности реактивации бактерий при обеззараживании сточных вод гипохлоритом натрия
7.3. Изучение влияния гуанидинсодержащего препарата на жизнеспособность бактерий в экспериментальных условиях с учетом реактивации
7.4. Изучение возможности реактивации индикаторных, условно-патогенных и патогенных бактерий в процессе фотообеззараживания
7.5. Изучение изменчивости культуральных свойств бактерий в процессе
обеззараживания
ГЛАВА 8. ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

Обеспечение эпидемической безопасности водопользования в отношении кишечных инфекций, распространяющихся водным путем, является первостепенной задачей микробиологического контроля качества воды. Надежность системы контроля, как основы профилактических мероприятий, обусловлена научно-обоснованными показателями и эффективными методами обнаружения и количественного учета возбудителей кишечных инфекций и их индикаторов [84, 109, 112, 113].
Вместе с тем до настоящего времени отмечаются вспышки кишечных инфекций при соответствии качества воды установленным требованиям [80, 82] Это может быть связано с появлением устойчивых штаммов патогенных бактерий, их способностью к размножению, в частности сальмонелл, в чистых водах, и как результат - с нарушением количественных соотношений индикаторных и патогенных бактерий [30, 85]. Поэтому требуется
совершенствование существующей нормативно-методической базы в направлении повышения адекватности оценки эпидемической безопасности водопользования.
В этом направлении, а также с целью унификации с международным сообществом, в последние годы происходит пересмотр нормативных требований к качеству воды по бактериологическим показателям, что определяет необходимость разработки и стандартизации методов определения бактериологических показателей: колиформные бактерии и глюкозоположительные колиформные бактерии, как основные надежные индикаторные показатели эпидемической опасности водопользования; Escherichia coli, как показатель фекального загрязнения водных объектов.
Методы, утвержденные в МУК 4.2.1018-01 [121], по ряду параметров не отвечают современному уровню: длительные сроки анализа (2-3 суток); низкая воспроизводимость результатов из-за субъективной выборки колоний; отсутствие учета изменчивости культуральных и биохимических свойств

результатов. Забор материала осуществляли петлей диаметром 1 мм из изолированных колоний и засевали двойным уколом до дна пробирки. Биохимическую активность бактерий оценивали по времени (скорости) развития реакции. Через каждые 0,5 часа отмечали время появления кислоты, начала видимого образования газа и время полной реакции (образование газа во всем объеме среды Гисса).
Каждый вариант опыта выполняли в 10 повторностях. Результаты исследований, представленные в иллюстративном материале, выражены в числе пробирок (в процентах), в которых началось видимое образование газа, за наблюдаемый промежуток времени. Это на практике отмечается как положительный результат. В качестве контроля определяли биохимическую активность бактерий E. coli, выросших на мембранном фильтре и не подвергнутых действию реактива.
Биохимический тест по определению ферментации лактозы до кислоты и газа выбран как основной признак при проведении идентификации колиформных бактерий, принятый как в нашей стране (МУК 4.2.1018-01), так и за рубежом. Метод определения ферментативной активности на полужидких средах наиболее подходит для выявления изменений в динамике проявления реакции ферментации под влиянием воздействия различных факторов, поскольку этот метод ускоренный, чувствительный, позволяет определить небольшое количество газа, наглядный при учете реакции.
3.1. Оценка степени бактерицидности оксидазных реактивов в отношении оксидазоотрицательных и оксидазоположительных бактерий
Результаты исследований по изучению диско-диффузионным методом влияния оксидазных реактивов на жизнеспособность бактерий, обладающих оксидазной активностью и не имеющих этого свойства, представлены в таблице 3.1.1. Показано, что 1% водный раствор ТМ, использующийся при постановке оксидазного теста (по МУК 4.2.1018-01), на изученные оксидазоотрицательные бактерии не оказывает какого-либо действия. В то