Адаптивный ответ лимфоцитов на облучение при некоторых генетических патологиях и при старении

• Автор: Бернадотт, Александра
• Шифр специальности: 14.01.30
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 92 с. : 8 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Некоторые теории старения, как звенья патогенеза старения

1.2. Пространственно-функциональная организация хромосом в ядре

1.3. Адаптивный ответ организма на малые дозы радиации

1.4. Эффект свидетеля

1.5 Синдромы генетической хромосомной нестабильности, репарация

двунитевых разрывов и РНК-полимераза II

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Выделение и приготовление образцов лимфоцитов из периферической крови человека
2.2. Определение фазы клеточного цикла, в которой находятся лимфоциты, методом проточной цитометрии
2.3 Облучение лимфоцитов
2.4 Культивирование клеток
2.5 Изучение эффекта свидетеля
2.6. Культивирование клеток с ингибитором РНК-полимеразы II, альфа-аманитином
2.7. Приготовление клеточных препаратов

2.8. Гибридизация и детекция ДНК-зондов
2.9. Получение и анализ изображения ядер Со-лимфоцитов человека
2.10. Программный метод оценки расположения сигнала в объеме
ядра клетки
2.11. Статистическая обработка результатов исследования
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Изменение положения хромосомы 1 в ядрах О0-лимфоцитов
при адаптивном ответе
3.2. Изменение положения хромосомы 1 в ядрах О0-лимфоцитов при адаптивном ответе при старении
3.3. Адаптивный ответ через эффект свидетеля в клетках молодых и старых доноров
3.4. Влияние мутации в генах ВЯСА1, 2 и АТМ на процесс подготовки к реализации гомологичной репарации, именно, сближения гомологичных локусов хромосом
3.5. Индукция одной из фаз гомологичной репарации альфа-аманитином -ингибитором РНК-полимеразы II в клетках молодых доноров, доноров старше 70 лет и доноров с мутациями В11СА1
3.6. Выявление субтоксичной дозы альфа-аманитина, при которой сохраняется эффект индукции сближения гомологичных локусов

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Расположение хромосом специфично для каждого типа клеток и сопряжено с особенностями экспрессируемых генов. И это говорит в пользу понятия «фенотип хроматина».
Также существенно, что клетки с генетическими патологиями имеют свои «знаки» особого фенотипа хроматина и расположения хромосом. В лимфоцитах доноров с синдромом Дауна расположение прицентромсрных областей отличается от здоровых доноров [Карпухин A.B. и др., 1996]. При синдроме Блюма, анемии Фанкони, в опухолевых клетках положение хромосом характеризуется большой вариабельностью [Hager H.D. et al., 1982; Zink D. et al., 1998]. В нейронах больных эпилепсией также менялось положение центромеры X хромосомы по сравнению со здоровыми донорами [Borden J. et al., 1988].
Положение хромосом различно в зависимости от клеточного цикла [Ferguson М. et al., 1992], от внешнего воздействия, от специфической реакции. Так, при конфокальной микроскопии Т-лимфоцитов человека при использовании хромосом-специфических зондов видно, что в Gi фазе клеточного цикла центромеры большинства хромосом занимают периферийное положение в ядре. Кроме того, часто хромосомы контактируют с ядерной оболочкой. Далее, при переходе от Gi к Gi-фазе центромеры большинства хромосом перемещаются от перифирии к центру ядра [Ferguson М. et al., 1992].
Положение хромосом меняется при действии внешних факторов