Патогенетические и клинические аспекты нарушений регуляции сигнализации транскрипционного фактора STAT 6 при бронхиальной астме

• Автор: Сорокина, Лада Николаевна
• Шифр специальности: 14.01.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 264 с. : 5 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Оглавление

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Строение и функции компонентов JAK-STAT-системы

1.2 Негативная регуляция JAK-STAT сигнальной системы

1.3 Модификация и деградация компонентов JAK-STAT сигнальной системы

1.4 Cross-talk взаимодействия

1.5 Полиморфизм гена белка STAT6 и бронхиальная астма

1.6 Рецепторы к IL-4 и IL-13: строение, функции и генетический полиморфизм

1.7 Лечебные “стратегии будущего”
Глава 2. Материалы и методы
2.1 Клиническая характеристика обследованных больных
2.2 Методологическая схема
2.3 Методы исследования
2.3.1 Выделение мононуклеаров периферической крови
2.3.2 Исследование экспрессии мРНК методом RT-PCR
2.3.3 Исследование экспрессии белков методом иммуноблоттинга
2.3.4 Определение концентрации цитокинов плазмы
2.3.5 Определение концентрации активной формы транскрипционного фактора STAT6 методом проточной флюориметрии
2.3.6 Определение полиморфизма rs324011 гена белка STAT
2.4 Методы статистической обработки
Глава 3. Результаты проведенных исследований
3.1 Характеристика экспрессии транскрипционного фактора STAT6 в мононуклеарах периферической крови при бронхиальной астме

3.2 Характеристика экспрессии транскрипционного фактора GATA-3 в мононуклеарах периферической крови при бронхиальной астме
3.3 Характеристика экспрессии альф а-субъединицы рецептора к интерлейкину-4 в мононуклеарах периферической крови при бронхиальной астме
3.4 Характеристика экспрессии транскрипционного фактора STAT4 в мононуклеарах периферической крови при бронхиальной астме
3.5 Характеристика экспрессии транскрипционного фактора T-bet в мононуклеарах периферической крови при бронхиальной астме
3.6 Характеристика экспрессии негативных регуляторов транскрипции генов SOCS1 и SOCS3 в мононуклеарах периферической крови при бронхиальной
астме
Глава 4. Обсуждение полученных результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
Приложение

СОКРАЩЕНИЯ
JAK-STAT - сигнальная система, состоящая из янус киназы и сигнального трансдуктора и активатора транскрипции (Janus Kinases - Signal Transducer and Activator of Transcription)
РТР - протеиновая тирозинфосфатаза
TCPTP - Т-клеточная РТР
SHP - содержащая SH2-домен РТР
SOCS - супрессор дитокиновой сигнализации
CIS-белок - цитокин-индуцируемый белок
IGF-1 - инсулиноподобный ростовой фактор
LPS - липополисахарид
PIAS - протеиновые ингибиторы активированных STAT-белков
HDAC - гистондиацетилаза
ISG15 - стимулированный интерфероном геи
SNP - единичный нуклеотидный полиморфизм
МСР-1- фактор хемотаксиса моноцитов 1 (monocyte chemoattractant protein-1) IRS - субстрат инсулинового рецептора
SCID - тяжелый врожденный комбинированный иммунодефицит (severe combined immunodeficiency)
NK - натуральные киллеры TNF - фактор некроза опухоли
GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

PIAS-белки. Следующая группа негативных регуляторов, которая еще недостаточно изучена, это PIAS-белки (протеиновые ингибиторы активированных STAT). Они влияют уже непосредственно на транскрипционную активность STAT белков. Семейство P1AS является эволюционно консервативным, поскольку гомологи PIAS-белков млекопитающих найдены у беспозвоночных и даже у растений. Оно представляет собой небольшую группу ядерных белков. У млекопитающих оно состоит из четырех представителей: 1) PIAS1/GBP (Gu-binding protein -Gu-связывающий белок), 2) PIAS3, 3) ARIP3/PIASxa (androgen receptor-interacting protein 3 - взаимодействующий с рецептором к андрогену белок 3), Mizl/PIASxp (Msx-interacting zinc finger protein - Msx-взаимодействующий цинксвязывающий белок) и 4) PIASy/y. PIASxa и PIASxp отличаются только их С-концевыми областями, а в остальном имеют идентичные последовательности аминокислот (Liu В., 1998; Wu L., 1997).
Молекула PIAS в своей структуре имеет щтк-связывающнй домен (Z/7-binding RJNG-finger domain), расположенный в центральной части молекулы; эволюционно очень консервативный SAP-домен - (SAF/acinus/PIAS-domain: SAF (scaffold attachment factor А/В) - обеспечивающий соединение факторов А и В), сохранившийся неизмененным в эволюции от дрожжей до человека и располагающийся в N-концевой части и менее консервативный С-концевой домен. PIAS соединяется с активированным STAT-димером и препятствует его взаимодействию с ДНК (Rawlings J.S., Rosier К.М., Harrison D.A., 2004; Rogers R.S., Horvath C.M., Matunis M.J., 2003).
Тонкие механизмы регулирования STAT активности с помощью PIAS белков на сегодняшний день до конца не изучены. Специфичность взаимодействий PIAS—STAT была выявлена в исследованиях на культивированных клетках млекопитающих методом ко-иммунопреципитации с помощью специфических антител к PIAS белкам. После цитокиновой стимуляции PIAS1, PIAS3 и PIASX взаимодействовали