Экспериментальное обоснование применения иммобилизированной дезоксирибонуклеазы I типа при лечении системной красной волчанки

• Автор: Симакова, Екатерина Станиславовна
• Шифр специальности: 14.01.22
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Волгоград
• Количество страниц: 178 с. : 9 ил.

Оглавление

ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Патогенетическое значение аутоантител к ДНК и

нуклеопротеидам при СКВ

1.2. Элиминация ДНК в норме и при СКВ

1.3. ДНКаза I. Характеристика фермента

1.3.1. Структурные и генетические аспекты

1.3.2. Особенности ферментативной и биологической функции ДНКазы!

1.3.3. Клинико-патогенетическое значение ДНКазы I при СКВ
1.3.4. Иммобилизированные формы ДНКазы I
ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Концепция исследования
2.2. Клинические методы
2.3. Получение образцов крови и плазмы
2.4. Синтез магнитоуправляемых гранул
2.5. Перфузия образцов крови in vitro
2.6. Получение компонентов иммунных комплексов
2.7. Подготовка установки для перфузии in vivo
2.8. Перфузия на экспериментальной модели
2.9. Измерение конечных точек исследования
2.10. Измерение показателей безопасности перфузии
2.11. Прочие лабораторные исследования
2.12. Статистические методы
ГЛАВА 3. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДУЕМЫХ. ГРУПП. 59 ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Исследование перфузии через МГ in vitro
4.1.1. Показатели эффективности
4.1.2. Показатели безопасности

4.2. Оценка валидности экспериментальной модели
4.2.1. Показатели эффективности
4.2.2. Показатели безопасности
4.3. Исследование перфузии через МГ in vivo
4.3.1. Основная подгруппа
4.3.1.1. Показатели эффективности
4.3.1.2. Показатели безопасности
4.3.2. Контрольная подгруппа
4.3.2.1. Показатели эффективности
4.3.2.2. Показатели безопасности
4.3.3. Сравнение основной и контрольной подгрупп
4.3.3.1. Показатели эффективности
4.3.3.2. Показатели безопасности
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

Перечень используемых сокращений
АлАТ...........аланинаминотрансфераза
анти-ДНК.......антитела к ДНК
анти-дсДНК.....антитела к двуспиральной ДНК
анти-дсДНКо концентрация анти-дсДНК у интактных животных
анти-дсДНК| концентрация анти-дсДНК после моделирующих процедур
анти-дсДНК2 концентрация анти-дсДНК после перфузии in vivo
Apr............аргинин
АсАТ...........аспартатаминотрансфераза
Асн............аспарагин
АФС............антифосфолипидный синдром
ВСК............время свертывания крови
Гис............гистидин
Г ли...........глицин
Г лн...........глутамин
ДИ.............доверительный интервал
ДНК............дезоксирибонуклеиновая кислота
дсДНК..........дву спиральная ДНК
ДНКцик.........ЦИК-связанная ДНК
ДНК0...........концентрация ДНК у интактных животных
ДНК]...........концентрация ДНК после моделирующих процедур
ДНК2...........концентрация ДНК после перфузии in vivo
ДНКаза I.......дезоксирибонуклеаза I типа
ИК.............иммунные комплексы
ИЛ.............интерлейкин
ИФА............иммуноферментный анализ
кДа............килодальтон
Кр.............концентрация креатинина
Л..............концентрация лейкоцитов
М..............среднее арифметическое
МГ.............магнитоуправляемые гранулы
ME.............международная единица концентрации анти-дсДНК
Me.............медиана

Важным элементом воздействия ДНКазы I на ДНК-содержащие субстраты, как свободно циркулирующие, так и фиксированные в тканях, является изменение их антигенных свойств. Результатом влияния фермента, как правило, является потеря иммунореактивности ДНК [29; 235; 237]. ДНКаза I способна разрушать ДНК-содержащие иммунные комплексы как в кровотоке, так и in situ [184; 271; 342]. Эффективность этого воздействия зависит от соотношения антиген-антитело в составе ИК [200]. При избытке ДНК-антигена фермент легко расщепляет ИК до небольших комплексов, содержащих одну молекулу иммуноглобулина и заключенный между её антигенсвя-зывающими центрами фрагмент ДНК длиной 35-45' пар оснований [199]. При увеличении доли антител резистентность ИК к ДНКазе I и размер нерасщеп-ляемых отрезков ДНК увеличиваются [118].
1.3.3 Клинико-патогенетическое значение ДНКазы I при СКВ
Многие аспекты биохимического и иммунологического действия ДНКазы I демонстрируют совпадение с важными элементами патогенеза СКВ, создавая предпосылки для углубления исследований в данном направлении. Повышению интереса к возможной роли ДНКазы I в предотвращении СКВ во многом способствовали результаты исследования М. Napirei и соавторов [209]. С помощью методики «нокаута» генов у мышей был удален ген ДНКазы I. Полученные таким образом мыши-гомозиготы Dnasel вместе с отсутствием активности ДНКазы I демонстрировали выработку антител класса IgG к нативной ДНК и хроматину, отложение иммунных комплексов и СЗ-компонента комплемента в почечных клубочках. Это проявлялось клиническими и гистологическими симптомами гломерулонефрита, периваскуляр-ной инфильтрацией в различных органах и, в большей части случаев, спле-номегалией.
Многими исследователями обнаружено снижение активности сывороточной ДНКазы I у большей части больных СКВ [27; 81; 97; 130; 211; 321], а также у мышей-гибридов NZB/NZW Fb являющихся экспериментальными моделями волчанки [228; 295]. У последних также отмечено значительное снижение активности ДНКазы I в моче [295]. В дальнейшем, при усовер-