Цитогенетическая характеристика гемопоэтических и стромальных клеток-предшественниц у больных миелодиспластическими синдромами

• Автор: Пименова, Мария Анатольевна
• Шифр специальности: 14.01.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 105 с. : 14 ил.

Оглавление

Список использованных сокращений

Введение

Актуальность проблемы

Цель исследования

Задачи исследования

Научная новизна и практическая ценность работы

Основные положения, выносимые на защиту

Структура диссертации

1. Обзор литературы

1.1. История знаний о МДС
1.2. Классификация МДС
1.3. Цитогенетические исследования при МДС
1.4. Клиническое значение хромосомных аномалий при МДС
1.4.1. Аномалии хромосомы
1.4.2. Аномалии хромосомы
1.4.3. Аномалии хромосомы
1.4.4. Комплексный кариотип и клональная эволюция МДС
1.5. МДС - клональное заболевание стволовой кроветворной клетки
1.5.1. Цитогенетические исследования кроветворных клеток-предшественниц
1.6. Роль стромального микроокружения
1.6.1. Строма костного мозга. Мезенхимальные стромальные клетки
1.6.2. Функциональные особенности стромы при МДС
1.6.3. Цитогенетические исследования клеток стромы
2. Материалы и методы
2.1. Дизайн исследования

2.2. Характеристика больных
2.3. Лабораторные исследования
2.3.1. Получение фракции мононуклеаров
2.3.2. Селекция CD34+ кроветворных клеток-предшественниц из костного мозга и периферической крови
2.3.3. Получение культуры МСК
2.3.4. Стандартное цитогенетическое исследование
2.3.5. Флюоресцентная in situ гибридизация
2.4. Статистический анализ
3. Результаты и обсуждение
3.1. Цитогенетическое исследование клеток костного мозга
3.2. Определение групп риска в соответствии с прогностическими шкалами IPSS, WPSS и IPSS-R
3.3. Результаты динамического наблюдения за больными МДС
3.4. Характеристика CD34+ клеток-предшественниц, полученных из костного мозга и периферической крови
3.4.1. Содержание CD34+ клеток в костном мозге и периферической крови
3.4.2. Исследование цитогенетических аномалий в CD34+ клетках
3.4.3. Хромосомные аномалии в CD34+ клетках в зависимости от клинического варианта заболевания
3.4.4. Хромосомные аномалии в CD34+ клетках в зависимости от их прогностической значимости
3.4.5. Хромосомные аномалии в CD34+ клетках в зависимости от клеточности костного мозга
3.4.6. Хромосомные аномалии в CD34+ клетках в зависимости от фиброза в костном мозге
3.5. Характеристика МСК костного мозга
3.5.1. Темпы роста культуры МСК у больных и здоровых лиц

3.5.2. Темпы роста культуры МСК в зависимости от клинического варианта заболевания, группы риска IPSS-R, клеточности костного мозга и наличия фиброза
3.5.3. Стандартное цитогенетическое исследование МСК
3.5.4. Цитогенетическое исследование МСК методом FISH
3.5.5. Клиническое наблюдение пациента с клональными нарушениями
кариотипа МСК
Заключение
Выводы
Библиографический список
Приложение

мышей при инактивировании рецептора к ретиноевой кислоте (RARy), а также работа американских исследователей о развитии индуцированной миелодисплазии в костном мозге мышей, сформировавшейся в результате делении ответственного за процессинг РНК гена DicerI [128, 160].
Изучение функциональных особенностей стромы при МДС необходимо для понимания биологии этого заболевания. В последнее время опубликованы работы о нарушении взаимодействия рецептор-лиганд между СКК и клетками стромы, в частности, значительно увеличена продукция МСК хемокина CXCL12 [56]. Фактор CXCL12 (SDF-1) ответственен за поддержание СКК в состоянии покоя в костномозговых нишах [120]. На поверхности МСК костного мозга у больных МДС изменена экспрессия молекул адгезии [7, 9]. В свою очередь, ММР могут способствовать нарушенной восприимчивости рецептора CXCR4 и инактивации хемокина CXCL12, что приводит к отрыву и выходу СКК в периферическую кровь [104]. При МДС нарушена регуляция сигнального пути Notch - важного механизма процесса клеточной дифференцировки, и пластичность МСК костного мозга снижена [100, 158]. В длительной культуре костного мозга соответствующие нарушения проявляются сниженной способностью МСК к поддержанию кроветворения in vitro и приводят к появлению блока дифференцировки кроветворных клеток-предшественниц, что имеет место при МДС. Стоит также отметить, что строма костного мозга больных МДС более эффективно взаимодействует с кроветворными клетками-предшественницами, выделенными из костного мозга больных, чем с их аналогами от здоровых лиц, и, следовательно, имеет ограниченную способность к поддержанию нормального кроветворения [8, 63, 137].
1.6.3. Цитогенетические исследования клеток стромы
Несмотря на общее мезодермальное (мезенхимальное) происхождение кроветворных компонентов костного мозга и клеток стромального микроокружения, попытки определения общей предшественницы, способной