Комплексная оценка качества гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови для клинического применения

• Автор: Кобзева, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 14.01.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 114 с. : 10 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение

ГЛАВА 1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Преимущества и недостатки пуповинной крови, как альтернативного

источника гемопоэтических стволовых клеток

1.2. Создание банков пуповинной крови

1.3. Сбор и обработка пуповинной крови

1.4. Тестирование концентратов пуповинной крови

1.5. Криоконсервирование и долгосрочное криохранение

клеток пуповинной крови

1.5.1. Криопротекторы
1.5.2. Этапы замораживания и долгосрочное криохранение гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови
1.6. Размораживание криоконсервированных клеток пуповинной крови
1.7. Клиническое применение криоконсервированных
гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материал исследования
2.2. Методы исследования
2.3. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Биологические характеристики гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови до и после длительного криохранения в автоматизированной системе «BioArchive®»
3.1.1. Влияние криохранения в автоматизированной системе «BioArchive®»
на качество гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови
3.1.2. Влияние методов лейкоконцентрации на качество гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови после криохранения в автоматизированной системе «BioArchive®»
3.1.3. Влияние величины гематокрита на качество гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови после криохранения в автоматизированной
системе «BioArchive®»
3.1.4 Влияние концентрации гемоконсерванта CPDA на качество гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови после криохранения в автоматизированной системе «BioArchive®»
3.2. Влияние отечественного криопротектора ДМСО+реополиглюкин
на качество гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови
3.3. Анализ иммуногенетических характеристик общественного регистра и эффективность подборов гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови в городе Москве
3.3.1. Особенности общественного регистра гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови
3.3.2. Анализ применения криоконсервированных гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови
3.4. Алгоритм взаимодействия Московского банка стволовых клеток с
клиническими центрами
ГЛАВА IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Эффективность первых аллогенных трансплантаций гемопоэтических ’ стволовых клеток (алло-ТГСК) пуповинной крови (ПК) у пациентов с различными заболеваниями привела к широкомасштабному развитию клинических исследований в данной области (Gluckman E., 2010; Wagner J.E., 2010; Broxmeyer,
H.E., 2011).
Благодаря уникальным свойствам клеток ПК, относительной простоте и безопасности их заготовки, на сегодняшний день ПК стала одним из наиболее востребованных альтернативных источников гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) во многих странах мира (Gluckman E., 2011; Ballen K., 2013). Ежегодно в мире проводится более 3000 алло-ТГСК ПК пациентам с различными заболеваниями (Rocha V., 2010).
С целью обеспечения систематической заготовки гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) ПК для длительного криохранения и использования их в клинической практике было создано 160 успешно функционирующих банков ПК, в которых на криохранении находится более 600 000 тестированных концентратов ПК (Welte K., 2010; Lauber S., 2010. Современная система банков ПК позволяет в короткие сроки накопить большое количество тестированных концентратов ПК, создать общественный регистр и подобрать подходящего донора для большинства пациентов, нуждающихся в проведении алло-ТГСК (Navarrete С., 1998; Armitage S., 1999; Brown J., 2000; Davey S., 2004, Бубнова JI.H., 2008).
Успех алло-ТГСК ПК во многом зависит от качества криоконсервированных ГСК ПК (Rubinstein Р. 2009; Wagner J.E., 2002; Gluckman E., 2005; Абдулкадыров K.M., 2006).
Проведенные в различных странах исследования по оценке качества ГСК ПК в продемонстрировали достаточный процент сохранения ГСК во время криохранения (Broxmeyer Н.Е. 2003, 2011; Zinno F., 2011). Рядом зарубежных

процент сохранения ЯСК - 78,9±15,41%, из них жизнеспособных 85,5±10,59%, СБ45+/С034+ клеток - 96,83±71,96%.
Похожее исследование по оценке качества было выполнено в институте проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины. Они показали высокий уровень сохранения ЯСК и С045+/СБ34+ клеток в жизнеспособном состоянии -до 98% и 94-98%. При оценке колониеобразующей активности клеток ПК их пролиферативный потенциал также оставался достаточно высоким (общее количество колоний составило 247,6±36,8) [2]. Однако в данном исследовании отсутствовала информация о количестве размороженных концентратов ПК, их количестве и сроках криохранения.
В России было проведено только одно подобное исследование на 231 образце ГСК ПК по оценке сохранности СБ45+, СП45+/СБ34+ клеток, колониеобразующей способности гемопоэтических стволовых клеток и длины теломер в зависимости от различных способов криоконсервирования (программное и неконтролируемое замораживание). Было показано, что криоконсервирование ПК необходимо проводить в программном замораживателе, а длительное криохранение должно осуществляться в диапазоне температур от -130°С до - 196°С. Количество ГСК ПК с иммунофенотипом СБ45+/СП34+ в концентрате ПК прямо пропорционально зависит от исходного количества ЯСК [6].
Таким образом, представленные данные не охватывают весь комплекс по оценке качества криоконсервированных ГСК ПК после длительного криохранения.
1.7 Клиническое применение криоконсервированных гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови
Благодаря уникальным свойствам клеток ПК, относительной простоте и безопасности ее заготовки, развитию глобальной сети банков ПК, усовершенствованию методов заготовки и улучшению качества подборов, на сегодняшний день ПК является одним их наиболее востребованных