Молекулярно-генетический мониторинг минимальной остаточной болезни после алло-ТГСК у больных множественной миеломой

• Автор: Загривная, Мария Викторовна
• Шифр специальности: 14.01.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 137 с. : ил.

Содержание
СОДЕРЖАНИЕ
ОБ ОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ .
ВВЕДЕНИЕ
1 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА ПРИ МОНИТОРИНГЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ТЕРАПИИ ММ. (СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ)
1.1 Современные подходы к терапии ММ
1.2. Методы оценки МОЕ
1.2.1 Иммунофлуоресцентный анализ и мониторинг МОЕ у больных ММ
1.2.2 Количественный анализ химеризма плазматических клеток (СИ138+)
1.3 МОЛЕКУЛЯРНЫЙ МОНИТОРИНГ МОЕ ММ
1.3.1 Клональные перестройки генов иммуноглобулинов, как опухолеспецифичный маркер для мониторинга МОЕ
1.3.2 Транслокации: преимущества и недостатки
1.3.3 Рекомбинация сегментов гена 1рН - ключ к опухоле-специфичной тест-системе для мониторинга МОЕ у больных ММ
1.3.4 ПЦР анализ и мониторинг МОЕ при ММ
1.3.5 Выбор методов анализа, перспективных для мониторинга МОЕ мм
2 ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ
2.1 Пациенты и клеточные линии
2.1.1 Пациенты, для которых проведен качественный и количественный мониторинг минимальной остаточной болезни.
2.2 Поэтапная схема подбора индивидуальных опухоль-специфичных тест-систем
2.2.1 Первый этап. Получение образца КМ пациента до терапии. Выделение ДНК
2.2.2 Второй этап. Амплификация с семейств-специфичньти праймерами
2.2.3 Третий этап. Получение клональной последовательности гена 1%Н
2.2.4 Четвертый этап. Сравнение последовательности 1рН с генетическими базами данных
2.2.5 Пятый этап. Подбор опухолъ-специфичных праймеров. Критерии для подбора опухолъ-специфичных праймеров
2.2.6 Шестой этап. Выбор оптимальной температуры отжига праймеров
2.2.7 Седьмой этап. Тестирование опухолъ-специфичных праймеров
2.3 Молекулярный мониторинг МОЕ
2.3.1 Качественный анализ (ПЦР с «вмонтированными» праймерами)
2.3.2 Количественный анализ. (Методика выполнения ПЦР анализа в реальном времени с использованием гидролизных проб - ТацМап).
2.4 Материалы, реагенты
3 РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 АЛГОРИТМ ИНДИВИДУАЛЬНОГО ПОДБОРА ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ МОНИТОРИНГА МОЕ ММ
3.2 Апробация методики молекулярно-генетического
АНАЛИЗА ПРИ МОНИТОРИНГЕ МОБ У БОЛЬНЫХ ММ В КЛИНИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ
3.2.1 Качественный анализ
3.2.2 Количественный анализ (ПЦР-РВ)
3.2.3 Магнитная селекция и последующий количественный анализ в линии клеток СИ 138+
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТОДИК
4.1 Проблема стандартизации молекулярных методик,
ОСНОВАННЫХ НА ДЕТЕКЦИИ КЛОНАЛЬНОЙ ПЕРЕСТРОЙКИ 1ИН
4.2 Факторы, влияющие на эффективность молекулярного
МОНИТОРИНГА МОБ БОЛЬНЫХ ММ, А ТАЮКЕ НА ПОДБОР ОПУХОЛЬ-СПЕЦИФИЧНЫХ тест-систем
4.2.1 Детекция клональной перестройки гена у больных ММ.
4.2.2 Молекулярный мониторинг МОБ в период активной регенерации КМ
4.2.4 Неудачи при подборе опухоль-специфичиых праймеров и их возможные причины
4.2.5 Проблема ложноотрицательных результатов при молекулярном мониторинге МОБ у больных ММ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

ММ39 РЭТЭР 3: Р35; 134; 05 все поликлональные 0
ММ40 7% 3: Р33,4а,5 все поликлональные 0
ММ41 рэрэр 5: Р33.5; 1.32,4; Э4а все поликлональные 0
ММ42 1.50% РЭРЭХ 3: Р34а; ІРІ; 1.4 • все поликлональные 0
ММ43 0% синусная кровь 0 0 0
ММ44 . РЭТЭР 4: Р32,4а; 134; 05 все поликлональные 0
ММ45 _ РЭРЭР 4: РвЗДа; 034,7; 02 все поликлональные 0
* Указанные в таблице наборы семейств-специфичных праймеров соответствуют:
FS-VH.PS [65], Б-УНЛЧЗ [41], ЬБ -УН.ЬБ [103, 105], Ь-УНХВ [19].
** Данные по %-му содержанию плазматических клеток отсутствуют.
2.1.1 Пациенты, для которых проведен качественный и количественный мониторинг минимальной остаточной болезни
Опухоль-специфичные тест-системы для качественного ПЦР анализа были подобраны для 13 пациентов (12 после алло-ТГСК и один пациент до алло-ТГСК (ММ11) и для клеточной линии (ТЮ-196). Опухоль-спецфичные тест-системы для количественного мониторинга МОБ были подобраны для 4 пациентов (ММ1, ММ4, ММ9, ММ11) и клеточной линии Т1В-196 (Таблица 2.2).
Таблица 2.2 - Краткая характеристика пациентов, для которых был проведен