Оценка влияния стромальных клеток жировой ткани на ангиогенез в тканях пародонта (экспериментальное исследование)

• Автор: Терновой, Юрий Викторович
• Шифр специальности: 14.01.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 101 с. : 29 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Морфологические аспекты хронического воспалительного процесса в тканях пародонта
1.2. Нарушение микроциркуляции при воспалительных и дистрофических заболеваниях пародонта
1.3. Разные типы клеток, источники их получения и возможности применения в пародонтологии
1.4. Изучение влияния стромальных клеток жировой ткани на ангиогенез на экспериментальных моделях лабораторных
животных

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Экспериментальные животные

2.2. Клиническая характеристика десны мышей линии ВКБЕПМТ
2.3. Гистологическая характеристика десны мышей линии ВКБІЖТ
2.4. Выделение и культивирование стромальных клеток жировой ткани
2.5. Прижизненное мечение стромальных клеток жировой ткани
2.6. Введение клеток экспериментальным животным
2.7. Прижизненный мониторинг распределения флуоресцентно меченых клеток
2.8. Оценка выживаемости меченых стромальных клеток жировой ткани в образцах десны экспериментальных животных
2.9. Иммуногистохимические методы
2.9.1. Оценка количества сосудов в ткани десны
2.9.2. Оценка количества макрофагов и клеток-предшественников методом флуоресцентной микроскопии образцов десны экспериментальных животных
2.9.3. Статистические методы и программные средства
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ
ЗЛ. Прижизненная оценка распределения флуоресцентно меченых стромальных клеток жировой ткани после введения в десну экспериментальных животных
3.2. Распределение меченых стромальных клеток жировой ткани после введения в десну экспериментальных животных
3.3. Изучение влияния стромальных клеток жировой ткани на ангиогенез
3.4. Сравнение аутологичных и аллогенных стромальных клеток жировой ткани для стимулирования ангиогенеза в десне
3.5. Увеличение миграции клеток-предшественников в ответ на введение стромальных клеток жировой ткани в десну мыши
3.6. Оценка вероятности развития местного негативного ответа на
введение стромальных клеток жировой ткани в десну мыши
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Оценка выживаемости стромальных клеток жировой ткани в образцах десны экспериментальных животных
4.2. Влияние стромальных клеток жировой ткани на ангиогенез в тканях пародонта
4.3. Увеличение миграции клеток-предшественников в десну мыши в ответ на введение стромальных клеток жировой ткани
4.4. Оценка местной реакции в ответ на введение стромальных
клеток жировой ткани в десну мыши
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ИЛ-1 а - интерлейкин 1 альфа ИЛ-1 Р - интерлейкин 1 бета ИЛ-6 - интерлейкин 6 ИЛ-8 - интерлейкин 8 КМ - костный мозг
МККМ - мононуклеарные клетки костного мозга
ММП - матриксная металлопротеиназа
МСК - мезенхимальные стволовые (стромальные) клетки
МСКЖТ - мультипотентные стволовые (стромальные) клетки жировой ткани
МСККМ - мультипотентные стволовые (стромальные) клетки костного мозга
ПОЛ - перекисное окисление липидов
ФИО - фактор некроза опухолей
BMP (англ.) -bone morphogenetic protein, костные морфогенетические белки САМ (англ.) - Са++ независимые молекулы клеточной адгезии нервных клеток позвоночных
DPSCs (англ.) - dental pulp stem cells, стволовые клетки пульпы зуба FGF (англ.) - fibroblast growth factor, фактор роста фибробластов FGF2 (англ.) - fibroblast growth factor 2, фактор роста фибробластов 2 типа GLP - good laboratory practice, надлежащая лабораторная практика (стандарт, разработанный AAALAC - Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care)
HGF (англ.) - hepatocyte growth factor, фактор роста гепатоцитов FILA (англ.) - human leukocyte antigene, антиген тканевой совместимости MLR (англ.) - mixed lymphocyte reaction, реакция смешанной культуры лимфоцитов
IGF1 (англ.) - insulin-like growth factor 1, инсулиноподобный фактор роста 1 PDGF (англ.) - plateled derived growth factor, тромбоцитарный фактор роста Sca-l(aHnr) - stem cell antigen 1, антиген стволовых клеток 1 типа TGF(i (англ.) - transforming growth factor p, трансформирующий фактор роста бета

среде проведено фенотипирование биоинженерных аутотрансплантатов. Полученные результаты свидетельствуют, что в суспензии клеток, полученных из дезинтегрированных гранул коллапана, присутствуют стволовые клетки двух видов: гемопоэтические клетки, экспрессирующие маркер CD34+, и
мезенхимальные с иммунофенотипом CD56lowCD54,owCD105+CD34XD45 [44].
Однако количество содержащихся в цельной крови стволовых клеток меньше, чем, например, в пуповинной крови или в костном мозге, и культивирование их является процессом трудоемким и часто нерентабельным (Повещенко О.В. и др., 2008, Zvaifler N. et al., 2000, Zhao Y. et al., 2003).
В последние годы особый интерес биологов и врачей вызывают мультипотентные стромальные клетки, получаемые из жировой ткани (МСКЖТ). Это обусловлено, в первую очередь, доступностью материала для выделения клеток, поскольку одним из способов их получения является косметическая липосакция. Популяция свежевыделенных клеток жировой ткани гетерогенна и характеризуется высоким содержанием клеток, экспрессирующих антиген CD34. В процессе культивирования наблюдается обогащение популяции клетками, несущими маркеры, идентичные МСК костного мозга, а именно CD29, CD44, CD71, CD90, CD105, CD106, CD166 (Деев Р.В., 2007, Григорьян A.C.,2009, Gronthos S. et al., 2001., Minguell J.J., 2001., Boguest A.C. et al., 2004, Bosch P. et ah, 2006, Mitchell J.et al., 2006, Dominici M. Et al., 2006, Kondo K. et al, 2009). Поэтому в ряде случаев МСКЖТ могут представлять собой альтернативу МСК из костного мозга, получение которых связано с определенными техническими и медицинскими проблемами (Сухих Г.Т., 2002., Глинских Н.П. ,2002, Бахтинов A.A.,2004, Повещенко О.В. и др., 2008, Кайдашев И.П. и др.,2009).
Показано, что МСКЖТ обладают пролиферативным потенциалом, способны дифференцироваться в клетки костной, хрящевой, жировой, мышечной, нервной ткани, в клетки сосудистой стенки (эндотелиальные и перициты) (Сухих Г.Т. и др., 2002, Корочкин Л.И , 2005, Черных Е.Р. и др., 2007, Шарифуллина С.З., 2007, Pittenger М.F. et ah, 1999, Kawamoto A. et ah, 2001, Di