Разработка нового биокомпозиционного материала, содержащего фактор роста эндотелия сосудов, для замещения костных дефектов (экспериментальное исследование)

• Автор: Рябова, Валентина Михайловна
• Шифр специальности: 14.01.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 77 с. : 27 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Механизмы формирования скелета: прямой и непрямой остеогенез

1.2. Репаративный остеогенез

1.3. Роль микроциркуляторного русла в процессе остеогенеза

1.4. Фактор роста эндотелия сосудов (ФРЭС)

1.5. Направления в разработке костезамещающих материалов

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Методика получения биокомпозиционного костезамещающего материала, содержащего ФРЭС
2.1.1. Получение ФРЭС
2.1.2. Исследование методик конъюгации ФРЭС и недеминерализованного коллагена
2.1.3. Оценка эффективности конъюгации недеминерализованного коллагена с ФРЭС
2.1.4. Оценка токсичности недеминерализованного коллагена содержащего ФРЭС
2.2. Культивирование клеточных линий и определение биологической активности ФРЭС в разработанном материале
2.3. Методика экспериментальных исследований биосовместимости материала, насыщенного ФРЭС, у животных
2.4. Методика экспериментальных исследований разработанного материала, насыщенного ФРЭС на регенерацию костной ткани

Глава 3. Результаты экспериментальных исследований
3.1. Результаты оценки эффективности конъюгации недеминерализованного
коллагена с ФРЭС
3.2. Результаты оценки токсичности разработанного материала in vitro
3.3 Результаты влияния костного коллагена, насыщенного ФРЭС, на
культуру клеток
3.4. Экспериментальные исследования биосовместимости материала на
основе костного коллагена, насыщенного ФРЭС и его влияния на ангиогенез
3.5. Экспериментальные исследования влияния материала на основе костного недеминерализованного коллагена, насыщенного ФРЭС, на процесс
заживления костных дефектов
Заключение
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
Список сокращений
bFGF (basic Fibroblast Growth Factor) — основной фактор рост фибробластов BMP (Bone morphogenetic proteins) — костный морфогенетический белок СНО-клетки (Chinese hamster ovary) - клетки яичника китайского хомячка. CTGF (Connective tissue growth factor ) - фактор рост соединительной ткани FGF (Fibroblast growth factor) - ангиогенный стимулирующий фактор HBMSC (Human bone marrow stromal cells) - стромальные клетки человеческого костного мозга
HGF (Hepatocyte growth factor ) - фактор роста гепатоцитов
HIF (Hypoxia-inducible transcription factor)- индуцируемый гипоксией
транскрипционный фактор
HUVEC (Human umbilical vein endothelial cells) - эндотелиальные клетки пупочной вены человека
MCSF (Macrophage colony stimulating factor) - макрофагальный
колониестимулирующий фактор
OPG (osteoprotegerin) — остеопротсгерин
РТН (passive hyperimmune therapy) - пассивная гипериммунная терапия TGF-ß (Transforming Growth factor beta) - трансформирующий фактор роста бега
ГАП - гидроксиапатит
ДСН-ПААГ - метод электофореза в полиакриламидном геле в’присутствии
додецилсульфата натрия
ОКП - остеогенные клетки-предшественники
сГ АГ - сульфатированные гликозаминогликаны
ТИ- тканевая инженерия
ФРЭС (VEGF- Vascular endothelial growh factor) - фактор роста эндотелия сосудов

Рис. 4 Термостат HeraCell (Thermo, USA) для инкубирования культуры клеток
Биологическую активность очищенного белка VEGF-A165 определяли по его способности поддерживать пролиферацию клеток эндотелия человека HUVEC. Эндотелиальные клетки HUVEC засевались в лунки 96-луночного планшета (2000 клеток/лунка) в базальной среде ЕВМ-2 (Lonza) для роста эндотелиальных клеток (рис. 5). После прикрепления клеток (через 4 часа) добавляли белок VEGF-A165 до концентрации от 1 до 100 нг/мл. Количество клеток определяли через 96 часов.
Рис. 5 96-луночный планшет (2000 клеток/лунка) с базальной средой ЕВМ-2 (Ьопга) для роста эндотелиалных клеток НЕГУЕС.