Механизмы гибели опухолевых клеток при действии новых катионных глицеролипидов

• Автор: Маркова, Алина Александровна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 149 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. Актуальность проблемы

2. Новизна темы

3. Научно-практическая значимость исследования

4. Цель работы

5. Задачи

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Фосфатсодержащие противоопухолевые липиды

1Л .Эдельфозин

1.2.Илмофозин
1.3.Милтефозин
1 АПерифозин
1.5.Эруфозин и эрицилфосфохолин
2. Бесфосфорные глицеролипиды алкильного типа с положительно
заряженным полярным доменом
3. Апоптотичсская гибель опухолевых клеток при действии фосфатсодержащих липидов 30 3 Л .Механизм действия эдельфозина и его аналогов,
опосредованный изменениями цитоплазматической мембраны
3.2.Механизм действия эдельфозина и его аналогов, опосредованный локализацией в эндоплазматическом ретикулуме
3.3.Развитие митохондриального пути апоптоза при действии фосфатсодержащих противоопухолевых липидов

4. Механизмы гибели опухолевых клеток
4.1 .Рецептор-опосредованный (внешний) апоптоз
4.2.Митохондриальный (внутренний) апоптоз. Каспазозависимый и каспазонезависимый пути
4.3. Некроз, регулируемый некроз, некроптоз
4.4.Аутофагия
4.5. «Митотическая катастрофа»
4.6. Аноикис
4.7. Энтоз
4.8. Партанатоз
5. Протеинкиназы как возможные мишени противоопухолевых липидов
5.1 .Протеинкиназы С
5.2. Протеинкиназа Met
5.3. Протеинкиназа Src
5.4. Киназа инсулинового рецептора
5.5. Протеинкиназа Pim-1
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Культивируемые клеточные линии
2. Препараты для исследований
3. МТТ-тест для исследования цитотоксичности
4. Исследование действия липидов на лимфоциты
5. Исследование способности липидов повреждать мембрану
эритроцитов
6. Исследование способности липидов повреждать смоделированную
мембрану липосом
7. Окраска клеток пропидия иодидом для исследования изменений

клеточного цикла
8. Обратная транскрипция и ПЦР (RT-PCR)
9. ПЦР в реальном времени (Real-time PCR)
10. Определение белков методом иммуноблоттинга
11. Окрашивание клеток аннексии V- пропидия иодид
12. Исследование межнуклеосомной деградации ДНК
13. Проверка изменения межмембранного потенциала митохондрий при
действии липидов
14. Наблюдение локализации флуоресцентно-меченного липида в клетке
15. Накопление липида 6FL в клетках С6
16. Исследование способности липидов к ингибированию протеинкиназ в тест-системе Streptomyces lividans aph VIII+
17. Скрининг протеинкиназ как возможных мишеней действия липидов
18. Исследование влияния липидов на функционирование
топоизомеразы I
19. Определение параметров связывания липид-ДНК
20. Моделирование возможного взаимодействия липидов с ДНК и топоизомеразой I
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Исследование цитотоксичности катионных глицеролипидов
2. Исследование способности липидов повреждать мембрану
эритроцитов и смоделированную мембрану липосом
3. Исследование изменений клеточного цикла
3.1. Окраска клеток пропидия иодидом
3.2. Изучение влияния катионных липидов на уровень р21watl/cipl
4. Определение типа гибели опухолевых клеток при действии

необходимую для ее активации путем фосфорилирования по ТЬг308 и 8ег473 [93, 94, 96, 97].
Важным аспектом действия эдельфозина и его аналогов на уровне клеточной мембраны является угнетение синтеза фосфатидилхолинов (РС) [98-102]. Поскольку РС -важнейший компонент клеточных мембран млекопитающих, их усиленный синтез необходим при делении клеток. Эдельфозин ингибирует фосфохолинцитидилтрансферазу (ССТ), что приводит к уменьшению синтеза фосфатидилхолинов [98-101]. В процессе биосинтеза РС поглощенные клеткой холины фосфорилируются холин-киназами, а затем ССТ катализирует перенос холина от фосфохолина на цитидин-5'-дифосфат (СБР-холин) [103], который используется холин-трансферазой вместе с диацилглицерином в синтезе РС [104-106]. ССТ - ключевой фермент в регуляции биосинтеза РС [104-106]. Эдельфозин и милтефозин ингибируют с1е пот синтез РС на этапе ССТ за счет своей схожести с природным регулятором ее физиологической активности ЬРС [98-102]. Такое конкурентное ингибирование препятствует синтезу СБР-холина, что угнетает синтез РС. Этот эффект, продемонстрированный при исследовании эдельфозина и милтефозина, вызывает арест в 02/М- фазе клеточного цикла и последующий апоптоз [107-109]. Если в случае лейкозных клеток механизм действия противоопухолевых алкильных фосфолипидов связан в первую очередь с активацией рецептор-опосредованного апоптоза, то для клеток солидных опухолей характерным событием перед гибелью является именно й2/М клеточный арест и последующий р53-независимый апоптоз [65]. В частности, перифозин при действии на линии НИ 12, НЮ0 и НаСаТ вызывает С2/М клеточный арест за счет экспрессии р21, что не зависит от экспрессии р53 [110].
Смена фаз клеточного цикла контролируется циклин-зависимыми киназами (сёк). Регуляция их активности в основном происходит за счет стехиометрического связывания сйк-ингибиторов с комплексом сбк-циклин. Белок р21"аП/сф1 является таким сс1к-