Преодоление лекарственной устойчивости липосомальными препаратами из группы нитрозоалкилмочевин

• Автор: Грищенко, Наталия Викторовна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 154 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Механизмы клеточной гибели

1.1.1. Апоптоз

1.1.2. Аутофагическая клеточная смерть

1.1.3. Некроз

1.1.4. Нетоз

1.1.5. Корнификация

1.1.6. Митотическая катастрофа

1.1.7. Энтоз
1.1.8. Партанотоз
1.2. Механизмы действия противоопухолевых препаратов нитрозоалкилмочевин
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы и реактивы
2.2. Оборудование
2.3. Методы исследования
2.3.1. Клеточные линии и их культивирование
2.3.2. Изучение цитотоксического действия препаратов методом
МТТ - тест
2.3.3. Метод двойного окрашивания с использованием Аннексина У-Р1ТС в комбинации с пропидием йодидом
2.3.4. Прямая реакция иммунофлуоресценции (РИФ)

2.3.5. Проточно-цитофлуориметрический анализ
2.3.6. Определение мРНК тРав и яРаэ
2.3.7. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты исследований
3.1. Исследование фенотипа клеточных линий меланомы
3.1.1. Статус С095/РаБ рецептора
3.1.2. Статус М1Ж1 гена
3.2. Цитотоксическое действие двух лекарственных форм производных нитрозометилмочевины на меланомные клеточные линии
3.2.1. Лиофилизированная араноза
3.2.2. Липосомальная араноза
3.3. Определение статистической значимости различий в проценте живых клеток после инкубации клеток с двумя лекарственными формами аранозы
3.4. Цитотоксическое действие двух лекарственных форм 011-2
на меланомные клеточные линии
3.5. Влияние двух лекарственных форм аранозы на индукцию апоптоза в клеточных линиях меланомы человека
3.6. Преодоление множественной лекарственной устойчивости липосомальной аранозой
Глава 4. Обсуждение результатов исследований
ВЫВОДЫ
Список литературы

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АТФ Аденозинтрифосфат
дАТФ Дезоксиаденозинтрифосфат
МОМР Пермобилизация наружной митохондриальной мембраны
МЛУ Множественная лекарственная устойчивость
ПЦР Полимеразная цепная реакция
РТРС Мультипротеиновый комплекс пермобилизующих пор
ТЭС Сыворотка эмбрионов крупного рогатого скота
AIF Фактор индуцирующий апоптоз
APAF1 Цитоплазматический адаптерный белок
dATP Цитоплазматический адаптерный белок
CAD Каспазо-активируемая ДНКаза
CARD Домен активации и рекрутирования каспазы
DD Домен смерти
DED Эффекторный домен смерти
DMSO Диметилсульфоксид
DISC Сигнальный комплекс индуцирующий смерть
FADD Белок, взаимодействующий с доменом смерти Fas-рецептора
FïTC Флуоресцеииизотиоциапат
HTRA2 Сериновая протеаза
lAPs Ингибитор апоптоза
р53 Белок - онкосупрессор
PI Пропидиум йодит
PS Фосфатидилсерин

ингибируя активность каспаз, либо вызывая гиперэкспрессию антиапоптотических белков. Программированный некроз в свою очередь может быть подавлен, если на клетки воздействовать антиоксидантами либо подавить активность протеинкиназы RIP [113]. Интересно, что протеинкиназа RIP является одной из мишеней действия каспаз. Это означает, что инициация и осуществление апоптоза активно подавляют развитие некроза в клетках. Физиологическое значение такого противоборства между апоптозом и программированным некрозом проявляется на двух системах. На клетках, инфицированных вирусом vaccinia virus, программированный некроз может быть не только вариантом гибели в условиях подавления апоптоза, но и выполнять функцию усиления иммунных реакций в ответ на инфицирование микроорганизмами. Отрицательная связь между апоптозом и программированным некрозом прослеживается и при повреждении ДНК, вызванном химическими агентами или ионизирующим излучением. В неопухолевых клетках в этих случаях включаются пункты проверки, действующие во всех фазах интерфазы клеточного цикла и предотвращающие вступление в митоз клеток с нарушенным геномом [49; 163; 174].
В случае нарушения механизмов репарации клетки погибают путем апоптоза. Однако, как оказалось, если в таких клетках с поврежденной ДНК нарушены механизмы осуществления апоптоза, что является достаточно распространенным в трансформированных клетках, клетки погибают путем программированного некроза. Физиологическое значение некроза в такой ситуации имеет двоякий смысл. С одной стороны программированная гибель клеток путем некроза в отсутствие апоптоза все же снижает риск передачи дочерним клеткам мутаций [49; 90]. С другой стороны, распад клеток при некрозе может способствовать активации иммунного ответа, многоклеточного организма [49].
Если проанализировать, в каких фазах клеточного цикла возможен тот или иной вариант гибели клеток, то складывается следующая картина. В