Влияние многофункционального белка YB-1 на лекарственную устойчивость и метастатическую активность клеток рака молочной железы

• Автор: Моисеева, Наталья Ивановна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 88 с. : 29 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Структура белка и гена YB

1.2.Функции белка YB

1.2.1. Роль белка YB-1 в цитоплазме клетки

1.2.2. Механизмы и причины перехода YB-1 из цитоплазмы в ядро клетки

1.2.3. Функции YB-1 в ядре клетки

1.2.4. Функциональные модификации белка YB-1 в клетке

1.2.5. Секреция белка YB-1 клетками
1.3.Множественная лекарственная устойчивость и белок YB
1.3.1. Феномен множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток
1.3.2. Белок YB-1 и регуляция генов и белков МЛУ
1.4.Белок YB-1 в клинических исследованиях
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Используемые культуры клеток и их модификации
2.1.1. Культуры клеток
2.1.2. Трансфекция культуры клеток MCF
2.2. Характеристики исследованных образцов опухолей, полученных от больных раком молочной железы (РМЖ)
2.2.1. Пациенты
2 2 2. Характеристика образцов опухолевой ткани
2.3. Рекомбинантные белки, использованные в работе
2.4. Исследование характеристик культур клеток
2.4.1. Анализ пролиферации клеток
2.4.2. Анализ устойчивости клеток к химиопрепаратам (МТТ-тест)
2.4.3. Анализ подвижности клеток. Тест на зарастание «раны» in vitro
2.5. Исследование уровня экспрессии мРНК в клеточных линиях и образцах опухолей

2.5.1. Выделение мРНК из культивируемых клеток и фрагментов опухолей
2.5.2. Обратная транскрипция
2.5.3. Полуколичествеиная реакция ОТ-ГГЦР и электрофорез
2.5.4. ПЦР в реальном времени (Real-time PCR)
2.5.5. Экспрессионные биочипы (RNA microarray)
2.6. Анализ количества и локализации белков
2.6.1. Иммунохимический анализ
2.6.2. Вестерн-блоттинг
2.7. Статистическая обработка результатов
2.8. Список растворов, сред и реактивов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 .Характеристики используемых в работе клеточных культур
3.1.1. Сравнение пролиферации трех клеточных культур
3.1.2.Чувствительность культур клеток к различным химиотерапевтическим препаратам

З.ЬЗ.Уровень экспрессии генов МЛУ и УВ-1 в клетках линий МСР-7, ВТ-474 и НВЬ-ЮО
3.1.4.Локализация белка УВ-1 в клетках культур МСР-7, ВТ-474 и НВЬ-ЮО
3.1.5.Резюм е
3.2.Влияние химиотерапевтических препаратов на локализацию белка УВ-1 и его
ЭКСПРЕССИЮ в линиях МСР-7, ВТ-474 и НВЬ-ЮО
3.2.1 .Транслокация белка УВ-1 в клетках линий МСР-7, ВТ-474 и НВЬ-ЮО при инкубации
с различными химиотерапевтическими препаратами
3.2.2.Исследованис профиля экспрессии гена УВ-1 и генов МЛУ в культурах
малигннзированных клеток молочной железы при добавлении доксорубицина и цисплатина
3.2.3.Исследования профиля экспрессии генов на биочипе НТ-12 (RNA microarray) в
линиях малигннзированных клеток молочной железы при воздействии доксорубицина и
цисплатина
3.2.4.Резюм е
3.3.Влияние внеклеточного белка УВ-1 на линии клеток MCF-7, ВТ-474 и НВЬ-ЮО

3.3.1.Перемещение белка РсЬЗ в клетках линии МСЬ-7 под действием внеклеточного белка УВ

3.3.2.Исследование влияния рекомбинантного УВ-1 (гУВ-1) на пролиферацию малигнизированных клеток молочной железы
3.3.3.Исследование влияния гУВ-1 на скорость закрытия раны, нанесенной на монослой
3.3.4.Исследование влияния гУВ-1 на устойчивость опухолевых клеток к химиопрспаратам
3.3.5. Исследование влияния внеклеточного гУВ-1 на экспрессию генов в клетках опухолей молочной железы (1ША гшегоаггау)
3.3.5.Резюм е
3.4.Исследование количества мРНК гена УВ-1 и его внутриклеточной
ЛОКАЛИЗАЦИИ В ОПУХОЛЯХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
3.4.1. Содержание мРНТС УВ-1 и внутриклеточная локализация белка УВ-1 в опухолях молочной железы
3.4.2.Сопоставление локализации и экспрессии УВ-1 с известными клиническими и
молекулярными характеристиками опухолей
3.4.3.Корреляция экспрессии гена УВ-1 и локализации белка УВ-1 в опухолевых клетках с прогрессией РМЖ
3.4.4.Резюм е
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Обсуждение результатов экспериментов по воздействию
ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ЛОКАЛИЗАЦИЮ И ЭКСПРЕССИЮ БЕЛКА УВ
4.2. Обсуждение результатов экспериментов по влиянию внеклеточного белка
УВ-1 НА МАЛИГНИЗИРОВАННЫЕ КЛЕТКИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
4.3. Обсуждение результатов исследования клинического материала, полученного от больных РМЖ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

2.2. Характеристики исследованных образцов опухолей, полученных от больных раком молочной железы (РМЖ)
2.2.1. Пациенты
В исследование включена 91 пациентка с диагнозом инфильтрирующий протоковый рак молочной железы I-III стадии. Возраст больных составил от 38 до 81 года с медианой 56 лет. У 65 пациенток выявлена II стадия заболевания (71.5%), у 7 (7.7%) - I стадия, и у 19 (20.8%) - III стадия. Все больные были прооперированы в ЦКБ№2 им. Н. А. Семашко в период с 2005 по 2008 год, в 99% случаях была проведена мастэктомия по Мадену, ив 1% - ампутация молочной железы. На первом этапе лечения 14 пациенток (15%) получали неоадъювантную химиотерапию (FAC - фторурацил 500 мг/м2, доксорубицин 50 мг/м2, циклофосфан 500мг/м2, каждые 21 день). Больным со второй и третьей стадией заболевания после мастэктомии проводилась лучевая и/или адъювантная химиотерапия (схема FAC или АС (доксорубицин 60 мг/м2, циклофосфан 600мг/м2) каждые 21 день). В зависимости от наличия рецепторов в опухоли, 63 больным была назначена гормональная терапия.
В нашей работе количество мРНК YB-1 методом ГТЦР в реальном времени (Real-time PCR) исследовали у 49 больных, а внутриклеточную локализацию белка YB-1 определили у 65-х больных. Время динамического наблюдения после операции составило от 8 до 42 месяцев с медианой 25.5 месяца. Данные о больных представлены в таблице 5. Распределение больных по возрасту, стадии заболевания и проведению неоадъювантной терапии в группах практически не отличается.