Рак шейки матки в Карелии: эпидемиологические, клинические, иммунологические и профилактические аспекты

• Автор: Ковчур, Павел Иванович
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 277 с. : 44 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. 1. Эпидемиология, диагностика, лечение и мониторинг рака шейки матки (обзор литературы)

1.1. Эпидемиология рака шейки матки

1.2. Рак шейки матки в России

1.3. Цитологический скрининг рака шейки матки

2. Молекулярно-генетические особенности развития рака шейки

2.1. Вирус папилломы человека как основной фактор индукции и прогрессии рака шейки матки
2.1.1. Структура генома ВПЧ. Механизм стимулирования пролиферации эпителиальных клеток и индукции неопластической трансформации. Начальные этапы онкогенеза

2.1.2. Интеграция вирусного генома. Нестабильность генома

2.1.3. Молекулярно-генетический профиль ЦИН и РШМ: современные представления

2.2. ВПЧ и показатели иммунной системы. Роль иммунной системы в патогенезе рака шейки матки
2.2.1. Ингибирующее действие ВПЧ на реакции локального иммунитета
2.2.2. Гуморальный ответ на ВПЧ
2.2.3. Роль СЦ4(+)/СЦ8(+) Т-клеточного иммунитета в борьбе с ВПЧ и РШМ
2.2.4. Индукция апоптоза Т-лимфоцитовпри РШМ
2.2.5. Регуляторные Т-лимфоциты при РШМ
2.3. Использование каспаз - универсальных исполнителей клеточных программ при раке шейке матки
2.3.1. Развитие РШМ и апоптоз-индуцирующих механизмов
2.3.2. Действие онкогенов ВПЧ на механизм каспаз-зависимого апоптоза
2.4. Гены раннего ответа в патогенезе рака шейки матки
2.4.1. Зависимость экспрессии генома ВПЧ от клеточных факторов с-Мус, с-Бов и сЛип
2.4.2. Воздействие онкогенов вируса на экспрессию генов раннего ответа
2.4.3. Прогностическое и диагностическое значение экспрессии генов раннего ответа при РШМ
2.4.4. Зависимость профиля генетической экспрессии от гистологического типа
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клинический материал (п= 1800)
2.1.1. Возраст и рак шейки матки
2.1.2. Клиническая симптоматика
2.1.3. 15-летняя выживаемость в возрастном аспекте

2.1.4. Цитологическое и гистологическое исследования
2.2. Клинический материал (п= 186)
2.2.1. Характеристика пациентов и методов получения биоматериала
2.3. Описание молекулярно-генетических и иммунологических методов исследования
2.3.1. ВПЧ-типирование
2.3.2. Иммунофенотипирование МНПК
2.3.3. Проведение полимеразной цепной реакции в «режиме реального времени» (ПЦР-РВ)
2.3.4. Определение активности каспаз
2.3.5. Анализ экспрессии белков с-Мус, с-Боя и с-Ат методом Уе51ет-блоггинга
2.3.6. Определение характера повреждений ДНК
2.3.7. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. Результаты исследования. Рак шейки матки у женщин Республики Карелия
3.1. Заболеваемость и смертность раком шейки матки
3.2 .Рак шейки матки в районах Республики Карелия и в г. Петрозаводске (1998-2012 гг.)
3.2.1 Рак шейки матки в первой группе районов (г. Петрозаводск, г. Костомукша, Кондопожский, Сегежский, Беломорский районы)
3.2.2. Рак шейки матки во второй группе районов (Питкяранский, Кемский, Пудожский, Пряжинский, Лоухский, Олонецкий, Прионежский районы)
3.2.3. Рак шейки матки в третьей группе районов (Калевальский, Суоярвский, Муезерский, Сортавальский, Медвежьегорский, Лахденпохский районы)
3.3. Скрининг рака шейки матки
3.3.1. Цитологический скрининг в Республике Карелия
3.3.2 Чувствительность цитологического исследования
3.3.3. Получение адекватного материала для цитологического исследования
3.3.4. Заключение
ГЛАВА 4. Вирусологические, иммунологические, молекулярногенетические методы диагностики РШМ
4.1. Вирусологические методы диагностики
4.1.1. ВПЧ и рак шейки матки
4.1.2. Определение вирусной нагрузки при фоновых заболеваниях, преинвазивном и микроинвазивном раке шейки матки
4.1.3. Онкобелок Е7 при фоновых заболеваниях, преинвазивном и микроинвазивном раке шейке матки. 168-1698
4.2. Иммунофенотипирование МНПК больных ЦИН 3 и РШМ
4.2.1. Исследование субпопуляционного состава и фенотипа МНПК
4.2.2 Т-регуляторные клетки (С04+СЦ25+) периферической крови при опухолевом росте

4.2.3. Сравнительное исследование экспрессии молекулярных маркеров Тгея (БОХРЗ и ТОР-[31) при ЦИН 2, 3 степени
4.3. Обсуждение показателей клеточного иммунитета при развитии РШМ
4.3.1. Значение регуляторных клеток в формировании иммунной супрессии при раке шейки матки
4.3.2. Обсуждение показателей клеточного иммунитета при развитии РШМ
5.Экспрессия каспаз в МНПК больных ЦИН 3 и РШМ
5.1. Анализ протеолитической активности (пост-трансляционный уровень) каспазы -3, -6 и каспазы-9 в МНПК
5.2. Анализ активности экспрессии рецептор-регулируемой каспазы -8, эффекторных каспаз -3 и -6, и каспазы-9 в МНПК на уровне мРНК (транскрипционной уровень)
5.3. Показатели активности апоптоза в МНПК при развитии РШМ
5.3.1. Экспрессия БаБ-рецептора (СБ95+) в МНПК
6. Экспрессия генов каспаз -3,-6 и -9 в ткани ЦИН 3 и РШМ
6.1. Определение относительного содержания мРНК методом ПЦР-РВ (транскрипционной уровень)
6.2. Определение протеолитической активности (посттрансляционный уровень)
6.3. Обсуждение экспрессии генов каспаз при развитии РШМ
7. Экспрессия генов раннего ответа (ГРО) в ткани ЦИН 3 и РШМ
7.1. Определение относительного содержания мРНК методом ПЦР-РВ
7.1.1. Экспрессия генов с-Роб
7.1.2. Экспрессия генов с-тус
7.1.3. Экспрессия генов с-_]'ип
7.2. Определение содержания белков с-Боб, с-Мус, с-1ип (ДУеБ1ет-блотгинг)
7.3. Дестабилизация ДНК при развитии РШМ
8. Обсуждение результатов экспрессии генов раннего ответа при РШМ
8.1. Экспрессия генов с-1об и сип
8.2. Экспрессия генов с-МУС
8.3. Заключение
ГЛАВА 5. Модель вторичной профилактики преинвазивного и микроинвазивного рака шейки матки
5.1. Введение
5.2. Клиническая оценка эффективности стандартного и комплексного лечения у 535 пациенток с предопухолевыми заболеваниями шейки матки

мезенхимальном превращении и метастазировании (в т.н., виментин, винкулин, эзрин, галектин-1, аннексии 2, протеин-дисульфид-изомераза); 2) белки, опосредующие резистентность к клеточной гибели (в т.н., представители семейства шаперонов Hsp70); 3) ферменты энергетического метаболизма (в т.ч
гликолитические ферменты, ЛДГ). В работах [230] описаны результаты исследования профилей белков, выделенных из биопсийного материала. При этом изменяется экспрессия белков цитоскелета (цитокератинов, тропомиозина), шаперонов, поверхностных протеогликанов, аннексинов, аполипопротеинов и др. Данная работа [230]. является попыткой применить интегративный принцип для анализа амплифицированных участков 5р- и 20q- плеч хромосом в клетках РШМ. Такой подход является одним из наиболее эффективных при поиске терапевтических мишеней и диагностических биомаркеров онкопатологии.
2.2. ВПЧ и показатели иммунной системы. Роль иммунной системы в патогенезе рака шейки матки
2.2.1. Ингибирующее действие ВПЧ на реакции локального иммунитета В многочисленных работах подчеркивается, что важную роль в генезе малигнизации эпителия шейки матки играет иммунная система. Показано, что наиболее часто ВПЧ разрешается в результате формирования Thl-иммунного ответа [20-22, 352]. В тоже время высокоонкогенные типы ВПЧ активно подавляют эндогенный ответ на уровне системы интерферонов и тормозят активацию 7Ъ//-подобных рецепторов. При этом в сочетании с низкими уровнями вирусного белка, образуемого в рамках инфекционного цикла, а также отсутствием воспаления и виремии, способствует длительному игнорированию этой инфекции иммунитетом [80, 153, 196, 205, 219, 251, 328, 352].
Концепция иммунологического надзора за опухолевым ростом впервые была сформулирована F.M. Burnet (1957) и L. Thomas (1959) [106, 339]. В настоящее время иммунологический надзор за опухолевым ростом рассматривается как компонент более сложного процесса «иммуноредактирования», который включает в себя 3 этапа: элиминацию, равновесие и ускользание опухоли от иммунного ответа [328, 352].
Многослойный эпителий шейки матки представлен, в основном, кератиноцитами и клетками Лангерганса (ЛК). Именно ЛК играют важную роль в