Белки CRABP в опухолях человека различного гистогенеза

• Автор: Фаворская, Ирина Алексеевна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Список использованных сокращений
ВВЕДЕНИЕ
1. Обзор литературы. Функции ретиноевой кислоты и белка С1СА.ВР1 в норме и при опухолевой трансформации
1.1. Введение
1.2. Физиологические функции ретиноевой кислоты
1.3. Метаболизм и транспорт ретиноевой кислоты
1.4. Рецепторы ретиноевой кислоты
1.5. Роль РК и ее рецепторов в канцерогенезе
1.6. Строение и функции белка С11АВР
1.7. Влияние С11АВР1 на чувствительность опухолевых клеток к РК
1.8. Экспрессия С11АВР1 в опухолях человека
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Растворы, реагенты и среды
2.2. Клеточные линии
2.3. Характеристика исследованных опухолевых образцов
2.4. Выделение нуклеиновых кислот
2.4.1 Выделение плазмидной ДНК
2.4.2. Выделение РНК из клеточных культур и образцов опухолевых тканей
2.4.3. Выделение фрагментов ДНК из агарозных гелей
2.5. Аналитический электрофорез ДНК в агарозных гелях
2.6. Молекулярное клонирование
2.6.1. Получение компетентных клеток Е. соП
2.6.2 Трансформация компетентных клеток Е.соН
2.6.3 Обработка ДНК рестрицирующими эндонуклеазами
2.6.4. Реакция лигирования
2.6.5. Клонирование кодирующей последовательности гена СИАВР1 с

2.6.6. Сайт-направленный мутагенез
2.7. Обратная транскрипция РНК
2.8. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
2.8.1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
2.8.2. ПЦР в реальном времени
2.9. Трансфекция
2.10. Инфекция псевдовирусными частицами
2.11. Анализ белков
2.11.1. Приготовление белковых лизатов
2.11.2. Вестерн-блот гибридизация
2.12. Исследование клеточных характеристик in vitro
2.12.1. Анализ динамики роста клеток
2.12.2. Тест на образование колоний в условиях разреженной популяции (клоногенность)
2.12.3. Тест на миграционную активность клеток
2.13. Анализ транскрипционной активности белков RAR
2.14. Исследование профиля экспрессии генов с помощью MicroArray анализа
2.15. Определение туморогенности
2.16. Иммуногистохимический анализ
2.17. Статистическая обработка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Получение линии НТ-1080 с гиперэкспрессией CRABP1 и его мутантной формы CRABP1 R131A
3.2. Исследование туморогенности полученных линий НТ-1080 с гиперэкспрессией CRABP1 и его мутантной формы CRABP1 R131A
3.3. Исследование транскрипционной активности рецепторов РК - белков RAR, в полученных клеточных линиях
3.4. Исследование характеристик полученных клеточных линий в культуре
in vitro

3.4.1. Исследование динамики роста полученных клеточных линий
3.4.2. Анализ способности к колониеобразованию в условиях разреженной популяции (клоногенность)
3.4.3. Исследование миграционной активности полученных клеточных линий
3.5. Исследование профиля экспрессии генов с помощью МюгоАггау анализа
3.6. Исследование экспрессии С11АВР1 в образцах бифазных синовиальных сарком человека
3.7. Исследование экспрессии СРАВР1 и СВЛВР2 в образцах немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) человека
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

Также следует отметить, что в биоинформатических исследованиях CRABP1 был выявлен как потенциальный регулятор мезенхимальноэпителиального перехода [167].
1.7. Влияние CRABP1 на чувствительность опухолевых клеток к

В ряде исследований показано, что повышение экспрессии CRABP1 может вызывать резистентность опухолевых клеток к воздействию РК. Как было уже описано выше, гиперэкспрессия CRABP1 в линии тератокарциномы F9 ослабляет действие РК как дифференцировочного агента [157]. Помимо этого, Blaese с соавт. обнаружили, что базальный уровень экспрессии CRABP1 в ряде опухолевых клеточных линий (MDA-МВ-231, НТВ43, НТВ35, SCC9 и другие) коррелирует с чувствительностью клеток к воздействию РК и радиации [168]. Клетки с высокой базальной экспрессией CRABP1 более устойчивы к комбинированному действую РК и радиации, чем клетки с низкой базальной экспрессией данного гена. Гиперэкспрессия CRABP1 в чувствительной к действию РК линии рака шейки матки НТВ35 приводит к формированию фенотипа, характеризующегося резистентностью к действию РК, а также к комбинированному действию РК и радиации [168]. Гиперэкспрессия CRABP1 в линии рака почки А-498 также приводила к выраженному снижению чувствительности к РК по сравнению с контрольной линией, не экспрессирующий данный ген [169].
В работе Guidez с соавт. показано, что гиперэкспрессия CRABP1 опосредует устойчивость клеток ОПЛ с транслокацией t( 11 ; 17)(q23 ;q21 ) с образованием химерного белка RARa-PLZF к дифференцировочному действию РК [170]. Известно, что из всех вариантов ОПЛ вариант с образованием химерного белка RARa-PLZF характеризуется наиболее плохим прогнозом, поскольку резистентен к лечению РК [171]. Случаи ОПЛ