Тамоксифен как поливалентный ингибитор множественной лекарственной резистентности

• Автор: Дудко, Евгений Александрович
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 126 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1-1. Тамоксифен: история создания, развитие представлений о механизме действия, клиническое применение
1-2. Разные биологические эффекты тамоксифена: ингибирование пролиферации и ангиогенеза, активация апонтоза
1-3. Множественная лекарственная резистентность, ассоциированная с выбросом лекарственных препаратов из клеток

1-3.1. Маркеры множественной лекарственной резистентности

1-3.2. Подходы к преодолению множественной лекарственной резистентности и причины клинических неудач
1-3.3. Тамоксифен как потенциальный ингибитор множественной лекарственной резистентности

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА III. РАЗРАБОТКА АЛГОРИТМА ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ОЦЕНКИ МОДИФИКАТОРОВ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
ГЛАВА IV. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ТАМОКСИФЕНА С БЕЛКАМИ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК РАЗНОГО ГИСТОГЕНЕЗА
IV-1. Взаимодействие тамоксифена с Pgp
IV-2. Взаимодействие тамоксифена с MRP
IV-3. Взаимодействие тамоксифена с BCRP
IV-4. Взаимодействие тамоксифена с LRP
ГЛАВА V. ВЛИЯНИЕ ТАМОКСИФЕНА НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ТРАНСПОРТНЫХ БЕЛКОВ Pgp И MRP
ГЛАВА VI. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
FDA - Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных
препаратов США
ЭРа - эстрогеновый рецептор а
ЭРр - эстрогеновый рецептор р
Pgp - Р-гликопротеин
MRP1 - белок множественной лекарственной резистентности (Multidrug Resistance-associated Protein)
BCRP - белок резистентности рака молочной железы (Breast Cancer Resistance Protein) LRP - белок резистентности рака лёгкого (Lung Resistance-related Protein)
PKC - протеинкиназа С
MDR - множественная лекарственная резистентность
FITC - флуоресцирующий краситель флуоресцеинизотиоцианаг
РЕ - флуоресцирующий краситель фикоэритрин

ВВЕДЕНИЕ
Наряду с высокой токсичностью большинства противоопухолевых препаратов, врожденная и индуцированная устойчивость к лекарственной терапии является важнейшим ограничением в достижении оптимальной эффективности лечения. Одним из универсальных механизмов развития устойчивости, который затрагивает не только большинство классических цитостатиков, но и современные таргетные препараты, является так называемая множественная лекарственная резистентность, обусловленная активацией выброса противоопухолевых препаратов из клеток. Молекулярной основой этого процесса являются белки, ассоциированные с множественной лекарственной резистентностью, самые распространённые из которых - Pgp, MRP1, BCRP и LRP. Высокий уровень экспрессии этих белков в клетке приводит к уменьшению внутриклеточной концентрации противоопухолевого препарата, и в результате этого рекомендованная к применению доза лекарства становится неэффективной.
Несмотря на многочисленные и многолетие попытки исследователей и клиницистов преодолеть множественную лекарственную резистентность и повысить эффективность химиотерапии, результаты остаются неудовлетворительными. Главную причину этого мы., видим в стратегически неправильном подходе к решению этой задачи. В большинстве работ оптимизируются «старые» и изучаются новые специфические ингибиторы функции одного из белков множественной лекарственной резистентности — Pgp. Но реальность такова, что этот наиболее изученный транспортёр, как упоминалось выше, не является единственным. В опухолевых клетках экспрессируются и коэкспрессируются разные белки, ассоциированные с множественной лекарственной резистентностью, и число их увеличивается с каждым годом. Следовательно, единственно эффективным может быть лишь воздействие, подавляющее функционирование разных транспортных белков, то есть механизм лекарственной устойчивости в целом.
Анализ данных литературы позволил предположить, что таким поливалентным ингибитором множественной лекарственной резистентности может быть антиэстроген тамоксифен, который является «золотым» стандартом в лечении рака молочной железы. Основанием для такого предположения послужили две группы фактов.
В экспериментах на культурах клеток показано, что тамоксифен может ингибировать механизм множественной лекарственной резистентности, ассоциированный с экспрессией Pgp. Выявлено взаимодействие тамоксифена с Pgp, конкуренция тамоксифена и противоопухолевых препаратов за связывание с Pgp и увеличение накопления цитостатиков в опухолевых клетках, экспрессирующих Pgp, после воздействия тамоксифена. По выявленным в этих экспериментах эффектам, тамоксифен был сходен с известным ингибитором Pgp - верапамилом.

Расчёта коэффициента БД для произвольных кривых
01 23456789 10
По оси абсцисс - количество окрашенных клеток, по оси ординат - объём добавляемых антител в мкл.
Кривая —■—
Оп - значение статистического теста Колмогорова-Смирнова при объёме антител п, рассчитанное с помощью программы Се110ие&
П2,5 х 100 = 30,0; 30,0/2,5 = 12,
05.0 х 100 = 60,0; 60,0/5,0 = 12,
О|о,о х 100 = 70,0; 70,0/10,0 = 7,0 ВО = 12,0+ 12,0 + 7,0 = 31,0 Кривая —•—
02,5 х 100 = 21,0; 21,0/2,5 = 8.
05.0 х 100 = 29,0; 25,0/5,0 = 5,
0,0,0 х 100 = 42,0; 42,0/10,0 = 4,2 ВО = 8,4+ 5,0+ 4,2= 17,
Таким образом, используя ряд концентраций антител, можно объединить значения количества окрашенных клеток при разных концентрациях в один коэффициент - БД, и разделить клетки по уровню экспрессии белка.