Иммунологическая эффективность противоопухолевых вакцин

• Автор: Бармашов, Александр Евгеньевич
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Иммунотерапия онкологических заболеваний

1.2. Клеточный противоопухолевый иммунитет

1.3. Гуморальный противоопухолевый иммунитет

1.4. Методы исследования иммунного ответа

1.4.1. Иммуноцитохимическая реакция

1.4.2. Проточная цитометрия

1.4.3. Метод ЕШРОТ

Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы и реактивы
2.2. Оборудование
2.3. Методы исследования
Глава 3. Результаты исследований
3.1. Оценка Т-клеточного иммунного ответа методом ЕЬЮРОТ у больных меланомой, получающих противоопухолевую вакцину
Мелавак
3.2. Оценка Т-клеточного иммунного ответа методом ЕЬКРОТ
у больных меланомой, получающих дендритноклеточную противоопухолевую вакцину
3.3. Оценка гуморального иммунного ответа у больных меланомой, получающих противоопухолевые вакцины
3.4. Сравнение Т-клеточного иммунного ответа у больных, получа-

ющих дендритноклеточную вакцину, с некоторыми клиническими
показателями
Глава 4.0бсуадение результатов исследований
ВЫВОДЫ
Список литературы

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АПК Антиген-презентирующая клетка
АТ Антитело
БЦЖ Аттенуированные микобактерии Кальметта-Жерена
ГЗТ Гиперчувствительность замедленного типа
ГМ-КСФ Гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор
ДК Дендритная клетка
ИЛ Интерлейкин
ИФН-у Интерферон-гамма
МКА Моноклональное антитело
МПК Мононуклеарные клетки периферической крови
ОАА Опухолеассоциированные антигены
ОЛ Опухолевый лизат
ФГА Фитогемагглютинин
ФИЦХ Флуоресцентный иммуноцитохимический анализ
ФИО -а Фактор некроза опухоли альфа
ЦТЛ Цитотоксический Т-лимфоцит
ADCC Антителозависимая клеточная цитотоксичность
CD Кластер дифференцировки
ELISPOT Enzyme-Linked ImmunoSpot — твердофазная модификация метода иммуноферментного анализа
FITC Флуоресцеинизотиоцианат
HLA Человеческий лейкоцитарный антиген
ITAM Активационная последовательность иммунных рецепторов
МНС Главный комплекс гистосовместимости
PBS Phosphate buffered saline - фосфатно-солевой буфер
РЕ Фикоэритрин
TGF Трансформирующий фактор роста

при +4°С. Добавляют лизирующий буфер (если проводиться работа с кровью) или фосфатно-солевой раствор. Далее центрифугируют при 1000 об/мин 7 мин. Сливают супернатант. Добавляют окрашенные флуоресцентной меткой Fab-фрагменты к пробам с немеченными антителами и инкубируют 30 мин при +4°С в темноте. После отмывок добавляют 1% раствор формалина и оценивают результаты на проточном цитофлуориметре.
Метод проточной цитофлуориметрии находит широкое применение для разных направлений научных исследований. К ним относятся характеризация изучаемой клеточной популяции [93], мониторинг пролиферации клеток [182] и их функциональной активности [76], в том числе внутриклеточная окраска для определения цитокинов (см. гл. 1.4), обнаружение различных сигнальных путей [81] клеток, вступающих в апоптоз[162]и др.
В частности, для прогноза развития хронической лимфоцитарной лейкемии рассматриваются такие клеточные маркеры, как CD38, ZAP70 и CD49d [178]. В зависимости от уровня их экспрессии клетками данной нозологии судят о степени прогрессирования заболевания.
Метод проточной цитометрии был использован в настоящем труде и фигурирует под более общим наименованием - непрямая реакция иммунофлуоресценции.
1.4.3. Метод ELISPOT
Метод ELISPOT был открыт в 1983 Sedgwick с соавторами первоначально для выявления В-лимфоцитов, продуцирующих специфические антитела [153]. Другими авторами в том же году была описана подобная технология детекции В-лимфоцитов по выработки иммуноглобулинов [61]. В этой же статье и дано было название - ELISPOT (от «Enzyme-linked immunosorbent spot»). Позже оригинальная методология ELISPOT была модифицирована: на твердой фазе сорбировали антитела для