Влияние Т-регуляторных клеток на киллерные свойства активированных лимфоцитов

• Автор: Велижева, Надежда Павловна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : 31 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы

Цель и задачи исследования

Научная новизна

Научно-практическая значимость

Положения, выносимые на защиту

Публикации по теме диссертации

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2Л Материалы исследования
2ЛЛ Источники получения МЛ
2Л.2 Клеточные линии
2Л.З Питательные среды
2 Л .4 Реактивы
2.2 Методы исследования
2.2.1 Методика выделения МЛ из периферической крови больных и здоровых доноров
2.2.2 Методика выделения МЛ из опухолевых экссудатов больных
2.2.3 Генерация активированных лимфоцитов
2.2.4 Морфологическое исследование
2.2.5 Цитотоксический тест
2.2.6 Оценка пролиферативной активности
2.2.7 Проточная цитометрия (ГАСБ-анализ) и характеристика антител.
2.2.8 Выделение СБЗ+ Т-лимфоцитов
2.2.9 Иммуномагнитная сепарация.регуляторных С04+С1)25+ Т-лимфоцитов
2.2.10 Иммуномагнитная сепарация регуляторных
СВ4+С025+СБ127Лт/- Т-лимфоцитов
2.2.11 Иммуномагнитная сепарация регуляторных С025+С049с1-Т-лимфоцитов
2.2.12 Выделение НК клеток
2.2.13 Флюоресцентная микроскопия
2.2.14 Иммуноферментный анализ (ИФА)
2.2.15- Статистические методы
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Морфологическая, иммунофенотипическая и функциональная характеристика активированных лимфоцитов, генерированных из мононуклеарных клеток периферической крови здоровых доноров
3.1.1 Цитотоксическая активность ЛАК
3.1.2 Пролиферативная активность ЛАК
3.1.3 Цитокиновый профиль ЛАК
3.1.4 Анализ иммунофенотипа ЛАК
3.1.5 Морфология ЛАК

3.2 Сравнительная характеристика иммунофенотипа ЛАК, генерированных из МЛ периферической крови здоровых доноров и пациентов с распространенными формами злокачественных новообразований
3.2Л Содержание СИ4+СБ25+ Т-лимфоцитов в ЛАК, генерированных из МЛ периферической крови больных и здоровых доноров
3.2.2. Анализ распространенности ЕохрЗ+ Трег в ЛАК, генерированных из МЛ периферической крови больных и здоровых доноров..
3.2.3. Анализ распространенности БохрЗ+ Трег в ЛАК, генерированных из МЛ опухолевых экссудатов больных
3.3 Выделение отдельных субпопуляций лимфоцитов с использованием различных вариантов иммуномагнитной сепарации
3.3.1 Выделение НК
3.3.2. Иммуномагнитная сепарация Т-регуляторных клеток
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ДК - дендритные клетки ИЛ-2 - интерлейкин-2 ИЛ-4 - интерлейкин-4 ИЛ-7 - интерлейкин-7 ИЛ-12 - интерлейкин-12'
ИЛ-13 интерлейкин-
HJI-2Ra -а-субъединица рецептора к интерлейкину-2 ИФ А -имму но ферментный анализ ИФНу - интерферон-у
ЛАК — лимфокин-активированные киллеры
МЛ-мононуклеарные лейкоциты
НК-натуральные киллеры
Трег - регуляторные Т-лимфоциты
Тх - хелперные Т-лимфоциты
ЦТЛ - цитотоксические Т-лимфоциты
ФИО -фактор некроза опухоли
ЭДТА -этилендиаминтетрауксусная кислота
CTLA4- антиген цитотоксических лимфоцитов
ЕохрЗ -пептид из семейства forkhead/winged-helix, регулятор транскрипции
GITR - глюкокортикоид индуцированный рецептор ФНО
Kir - рецептор подавления цитотоксичности (killing inhibition receptor)
МНС - главный комплекс гистосовместимости
MMR- система репарации ДНК (mismatch-repair)
NKG2D-рецептор активации цитотоксичности киллерных клеток 2-го типа
NKp30 - рецептор цитотоксичности киллерных клеток 1-го типа
RAG-1 -ген, активирующий V-D-J рекомбинацию иммуноглобулинов
TCR - Т-клеточный рецептор
TGF-ß - трансформирующий фактор роста-ß

клеточного соотношения CD3+/Foxp3+ в сочетании с пониженным уровнем CD3+ Т-лимфоцитов является более значимым прогностическим фактором, оказывающим влияние на безрецидивную и общую выживаемость пациентов [149].
В другом исследовании приняли участие 133 пациента с операбельным раком желудка. При изучении прогностической значимости качественного и количественного состава опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов было

установлено, что содержание в, опухолевом очаге повышенного уровня Foxp3+ Т-регуляторных клеток и сокращение количества CD8+ Т-лимфоцитов ассоциируется у пациентов с неблагоприятным прогнозом и является независимым прогностическим фактором [147].
Анализ; результатов гистологического исследования 87 образцов, полученных у пациентов^ с плоскоклеточной карциномой ротовой полости показал, что сокращение продолжительности жизни пациентов
ассоциируется с пониженным количеством стромальных CD8+ и повышенным уровнем CCR4+ регуляторных лимфоцитов, независимым прогностическим фактором при этом является низкое соотношение клеток CD8+/CCR4+, в то время как общее количество Т-регуляторных лимфоцитов с фенотипом CD4+CD25+ прогностической значимости не имеет [146].
При исследовании опухолевых образцов, полученных у 102 пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой также установлена связь и клиническая значимость экспрессии трансформирующего фактора роста TGF-betal с инфильтрацией опухолевой ткани Foxp3+ Т-регуляторными лимфоцитами и
продолжительностью безрецидивной и общей выживаемости больных [145].

Принципиально иные результаты были получены в крупном исследовании Frey D'. М. и соавторов., в котором авторы проанализировали частоту и прогностическую значимость опухоль-инфильтрирующих Foxp3+ Т-регуляторных лимфоцитов при колоректальном раке у пациентов с различным статусом системы репарации ДНК (mismatch-repair (MMR) status). С помощью метода матричного анализа ДНК в работе было исследовано