Анализ полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой системы, бета-адренорецепторов и индуцибельной синтазы у больных артериальной гепертонией в Республике Мордовия

• Автор: Тимошкина, Елена Ивановна
• Шифр специальности: 14.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 109 с. : 21 ил.

Содержание

Список используемых сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Артериальная гипертония - состояние проблемы

1.2. Патогенетические механизмы развития и генетические аспекты артериальной гипертонии
1.3. Роль 1/Е) полиморфизма гена ангиотензин - превращающего фермента в развитии артериальной гипертонии
1.4. Роль полиморфизма гена ангиотензина II рецепторов 1 типа в развитии артериальной гипертонии
1.5. Роль полиморфизма гена бета - адренорецепоров в развитии артериальной гипертонии и ее осложнений
1.6. Роль полиморфизма гена индуцибельной N0 синтазы в развитии артериальной гипертонии

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Общая характеристика обследованных больных
2.2. Инструментальные методы исследования
2.3. Лабораторные методы исследования
2.4. Методы статистической обработки результатов исследования
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Изучение инсерционно-делеционного полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.2. Анализ распределения частоты аллелей и генотипов А1166С полиморфного маркера гена ангиотензина II рецепторов 1 типа (АТ2111) у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.3. Изучение полиморфного варианта АІбОІу гена бега 2 - адренорецеп-торов у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия

3.4. Анализ С1п2701и полиморфизма гена бета 2 - адренорецепторов у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.5. Анализ полиморфизма гена индуцибельной N0 синтазы у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.6. Роль ген - генного взаимодействия
Глава 4. Обсуждение результатов
Выводы
Практические рекомендации
Литература

Список сокращений, принятых в диссертации
АГ - артериальная гипертония
АД - артериальное давление
АСЕ - ангиотензин — превращающий фермент
Ао - аорта
ГБ - гипертоническая болезнь
ДАД - диастолическое артериальное давление
ИММ - индекс массы миокарда
ИМТ - индекс массы тела
КДО - конечно - диастолический объем левого желудочка КСО - конечно - систолический объем левого желудочка КДР - конечный диастолический размер левого желудочка КСР - конечный систолический размер левого желудочка ЛП - левое предсердие ММЛЖ - масса миокарда левого желудочка (Ж - отношение шансов ПАГ - первичная артериальная гипертония ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов ПЦР - полимеразная цепная реакция РААС - ренин - ангиотензин - альдостероновая система РКНГЖ - Российский кардиологический научно-производственный комплекс
САД - систолическое артериальное давление
СНС - симпатическая нервная система
ТЗСЛЖ - толщина задней стенки левого желудочка
ТМЖП - толщина межжелудочковой перегородки
ФВ - фракция выброса
Хл - холестерин
ЭхоКГ - эхокардиография
ЭКГ - электрокардиограмма

молекулярной генетики РКП ПК г. Москва.
Для исследования полиморфизма генов ангиотензин - превращающего фермента, ангиотензина II рецепторов 1 типа, бета 2 - адренорецепторов в позициях ArglôGly, Gln27Glu и индуцибельной NO синтазы, после получения информированного добровольного согласия у пациентов, из локтевой вены брали 5 мл крови, которую собирали в пробирки типа вакутейнера с ЭДТА. Кровь замораживали при -70С, затем транспортировали в Москву. Для транспортировки использовали изометрические контейнеры с аккумуляторами холода, не допускающие размораживания. ДНК выделена из лейкоцитов периферической крови методом фенол - хлороформной экстракции (Johns, 1989). Анализ полиморфных маркеров проводили методом ПЦР с последующим ПДРФ анализом (Miyamoto Y., 1998) с использованием соответствующих праймеров.
Типирование полиморфизма ДНК
Выделение ДНК из замороженной цельной крови методом фенол -хлороформной экстракции с использованием протеиназы К
Кровь собирали в пробирки типа вакутейнера с ЭДТА в качестве антикоагулянта (1 объем раствора 0,1 М Na2— ЭДТА, pH 8,0 (20°С) + 10 объемов крови). Хранили при -20°С. При выделении ДНК добавляли в 1,5 мл -пробирку 700 мкл размороженной крови и 700 мкл ТЕ - буфера (ЮмМ Трис-НС1, pH 8,0, 1мМ ЭДТА), перемешивали на вортексе и осаждали клеточный осадок центрифугированием 2 мин при 10.000 g. Удаляли 1 мл супернатанта. Клеточный осадок ресуспендировали на вортексе или постукивая о дно пробирки, затем добавляли 1мл ТЕ - буфера и повторяли осаждение клеток центрифугированием. Удаляли весь супернатант. Проделывали это дважды, пока осадок не становился бесцветным либо слабоокрашен-ным. К клеточному осадку добавляли 400 мкл буфера для протеиназы К (ЮмМ Трис-С1, pH 7,4, 10 мМ ЭДТА, 150 мМ NaCl), содержащего 0,5% SDS и 100 мкг/мл протеиназы К. Фермент добавляли из сток-раствора (20