Методы лабораторной оценки и стандартизации кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИД

• Автор: Чеканова, Татьяна Александровна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 151 с. : ил.

1. Обзор литературы

1.1. Этиология ВИЧ-инфекции

1.2. Иммунная система при ВИЧ-инфекции. Иммунопатогенез

1.3. Современное состояние проблемы разработки вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИД

1.4. Подходы к разработке вакцины против ВИЧ-инфекции/СПИД. Состав анти-ВИЧ-иммуногенов
1.5. Методологические подходы для лабораторной оценки кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИД

2. Материалы и методы

2.1. Кандидатные вакцины против ВИЧ-инфекции/СПИД

2.1.1. Кандидатная вакцина «ВИЧРЕПОЛ»

2.1.2. Кандидатная вакцина «ТВІ-ВПЧ для инъекций»

2.1.3.Кандидатная вакцина «КомбиВИЧвак»

2.1.4. Кандидатная вакцина «САЛ-ВИЧ-«Д» суппозитории»
2.2. Коммерческие тест-системы
2.3.Сыворотки крови человека и стандартные образцы для оценки подлинности кандидатных-вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИД
2.4. Рекомбинантные антигены ВИЧ
2.5. Лабораторные животные
2.6. Методы
2.6.1 Методика проведения непрямого ИФА для подтверждения ВИЧ-специфической антигенной активности (подлинности) кандидатных вакцин по реактивности вакцинных антигенов с сыворотками крови
человека
2.6.2.Методика проведения «сэндвич»-ИФА для подтверждения ВИЧ-специфической антигенной активности (подлинности) кандидатных вакцин «ТВІ-ВПЧ для инъекций» и «КомбиВИЧвак»

2.6.3. Изучение гуморального ответа у мышей после однократной иммунизации на иммуносорбентах с гомологичным вакцинным антигеном ;
2.6.4. Изучение динамики индукции антител класса G у мышей после двукратной иммунизации кандидат-вакцинами на иммуносорбентах с гомологичным вакцинным антигеном
2.6.5. Изучение уровня антител класса G у иммунизированных мышей кандидатными вакцинами «ВИЧРЕПОЛ», «КомбиВИЧвак», «ТВІ-ВПЧ для инъекций» к индивидуально иммобилизованным рекомбинантным белкам Env, Gag и на иммуносорбенте (Env+Gag)
2.6.6. Методика изучения иммунореактивности антител в сыворотках крови иммунизированных мышей с рекомбинантными белками (пептидами) иммуносорбентов коммерческих ИФА-тест-систем
2.6.7. Методика изучения спектра антител в сыворотках крови иммунизированных и интактных мышей в иммунном блоттинге
2.6.8. Методика изучения антиген-связывающей активности сывороток мышей, иммунизированных «ВИЧРЕПОЛ», в конкурентном ИФА в коммерческих тест-системах, выявляющих антиген р24 ВИЧ
2.6.9. Реакция вирусной нейтрализации
2.6.10. Изучение ВИЧ-специфической индукции цитотокин-продуцирующих клеток у ммунизированных мышей методом ELISPOT
2.6.11. Определение ВИЧ-специфических йзотипов IgGl и IgG2a в сыворотках крови иммунизированных мышей
2.6.12. Статисическая обработка результотов
3. Результаты и обсуждение
3.1. Доклиническое изучение кандидат-вакцины «ВИЧРЕПОЛ»
3.1.1. Определение ВИЧ-специфической антигенной активности вакцины
, «ВИЧРЕПОЛ» методом непрямого ИФА
3.1.2. Оценка гуморального ответа у иммунизированных однократно «ВИЧРЕПОЛ» мышей на гомологичный антиген

3.1.3. Определение антител класса G в сыворотках крови мышей, ммунизированных двукратно «ВИЧРЕПОЛ», на гомологичный вакцинный антиген
3.1.4. Изучение иммунореактивности антител в сыворотках крови иммунизированных «ВИЧРЕПОЛ» мышей с рекомбинантными белками/пептидами на иммуносорбентах коммерческих тест-систем, выявляющих антитела к ВИЧ
3.1.5. Изучение спектра антител в сыворотках крови мышей, иммунизированных двукратно «ВИЧРЕПОЛ», методом иммунного блоттинга
3.1.6. Исследование специфической антиген-связывающей активности сывороток крови мышей, иммунизированных «ВИЧРЕПОЛ», в конкурентном ИФА в тест-системах, выявляющих антиген р24

Заключение по главе 3.1
3.2. Адаптация методов ИФА и иммунного блоттинга для лабораторного контроля кандидатных вакцин «ТВ1-ВПЧ для инъекций» и «КомбиВИЧвак»
3.2.1. Исследование иммунореактивности антител в сыворотках крови ВИЧ-инфицированных лиц с эпитопами белка-иммуногена TBI
3.2.2. Оценка гуморального ответа у мышей линии Balb/c, иммунизированных «ТВ1-ВПЧ для инъекций» и «КомбиВИЧвак»
3.2.3. Изучение сывороток крови мышей, иммунизированных двукратно «ТВ1-ВПЧ для инъекций» и «КомбиВИЧвак», в тест-системах, выявляющих антитела к ВИЧ типов 1 и 2, методом ИФА и иммунного

блоттинга
3.2.4. Изучение уровня антител класса G у иммунизированных мышей кандидатными вакцинами «ВИЧРЕПОЛ», «КомбиВИЧвак», «ТВ1-ВПЧ для инъекций» к индивидуально иммобилизованным рекомбинантным белкам Env, Gag и на иммуносорбенте (Env+Gag)

Таблица 2.2.
Схемы двукратной иммунизации мышей кандидатными вакцинами.
Вакцина Способ введения Время забора кров иммунизации с инте] и у мышей после второй звалом в 28 дней, сутки
7 14 21
ВИЧРЕПОЛ в/м + н.и. н.и. н.и.
в/бр + + + н.и.
п/к + н.и. н.и. н.и.
КомбиВИЧвак в/м + + н.и. н.и.
в/бр + + + +
п/к + + + н.и.
ТВІ-ВПЧ в/м + + > н.и. н.и.
п/к + + + н.и.
в/б + + н.и. н.и.
САЛ-ВИЧ-«Д» ректально + + + н.и.
Примечание:
в/м - внутримышечный способ введения, в/бр - внутрибрюшинный способ введения, п/к - подкожный способ введения н.и. - не исследовали,
+ - изученная схема