Изучение иммуностимулирующей активности естественных и синтетических олигодезоксинуклеотидов бактерильной ДНК

• Автор: Пак, Владимир Геннадьевич
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 90 с. : 16 ил.

Содержание

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОРЛИТЕРАТУРЫ

Бактериальная ДНК

Краткая история

Структурное строение ДНК

Структурные различия ДНК прокариотов от эукариотов

Основные типы СрО ОДН

«Э» или «А» тип ОДН

«К» или «В» тип ОДН

«С» тип ОДН
Иммуностимулирующие эффекты СрО ОДН
В-лимфоциты
IIДК
Моноциты и макрофаги
14К и Т-лимфоциты
Нейтрофилы
Молекулярные механизмы стимуляции иммунокомпетентных клеток СрО

Распознавание СрИ ДНК
Т1Л1-9, ОИА-РКб
Индукция врожденного и адаптивного иммунного ответа
Устойчивость к инфекциям
Адъювантные свойства
Возможность иммунотерапии при аллергических состояниях
Противоопухолевые эффекты СрО ДНК
СрО ДНК как адъювант опухолевых вакцин
Эффекты на различных экспериментальных моделях
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Реактивы
Оборудование

Получение естественных ОДН
Определение ДОК к ЭБ после подкожного введения CpG мотивов
естественных и синтетических ОДН
Анализ хемилюминссценции фагоцитарных клеток
Забор крови и выделение МНК
Определение митогенных свойств ОДН в культуре МНК здоровых доноров

Определение NK-литической активности МНК здоровых доноров после
инкубации с CpG ОДН
Продукция внутриклеточной перекиси водорода лейкоцитами
Продукция цитокинов МНК здоровых доноров
Определение провоспалительных Thl-зависимых цитокинов in vivo
Определение NK-активности спленоцитов мышей после введения ОДН
Анализ поглотительной и бактерицидной активности клеток
перитонеального экссудата мышей
Анализ поглотительной активности клеток перитонеального экссудата
мышей
Анализ внутриклеточного киллинга бактерий
Резистентность мышей к экспериментальной инфекции
Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Влияние ДНК E. coli М17, естественных и синтетических ОДН на
гуморальный иммунный ответ
Влияние ДНК и ОДН на хемилюминесценцию спленоцитов
Влияние различных типов ОДН на пролиферативную активность МНК
здоровых доноров
Влияние ОДН на NK-литическую активность МНК здоровых
доноров
Влияние различных типов ОДН иа образование внутриклеточной
перекисиводорода
Влияние ОДН на продукцию МНК здоровых доноров ИЛ-12р70

Продукция ИФН-а МНК здоровых доноров индуцированная ОДН
Влияние ОДН на продукцию ИФН-у МНК доноров
Влияние на продукцию цитокинов in vivo
Уровень сывороточного ИЛ-12р70 мышей после введения ss ODN, 2395ps,
2006ps
Влияние ss ODN, 2006ps, 2395ps на уровень ИЛ-12р70 in vivo
спленоцитами
Влияние ss ODN, 2006ps, 2395ps на уровень ИФН-у спленоцитами
Влияние ss ODN, 2006ps, 2395ps на NK-литическую активность спленоцитов
мышей к Yac
Влияние ОДН на поглощение и бактерицидность клеток перитонеального
экссудата после внутрибрюшинного введения мышам
Влияние ОДН на неспецифическую резистентность мышей к экспериментальной инфекции
Заключение
Выводы
Список литера туры

опухоли. Повторное введение CpG ОДН этим мышам клеток опухолевой линии МВ-49 показывает, что большинство мышей устойчивы и защищены в течение продолжительного времени. Это наводит на мысль, что действие CpG ОДН затрагивает иммунологическую память.
Использование CpG в комбинации с аденовирусными векторами,
кодирующими CD40L, цитокин, индуцирующий ФНО-опосредованную активацию, ИЛ-2, ИЛ-15 вызывает повышение антиопухолевых эффектов и увеличение концентрации ИЛ-12 в сыворотке мышей, являющимся индикатором ТЫ -зависимого ответа [Ninalga et al., 2005].
CpG ДНК как адъювант опухолевых вакцин
Эксперименты на животных показали, что стимуляция CpG мотивами дендритных клеток и NK-лимфоцитов улучшает специфический
противоопухолевый иммунитет. В этом случае, CpG ОДН сами по себе или в комбинации с опухолевыми вакцинами, моноклональными
антителами повышают антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ). Изучается способность CpG ОДН вызывать функциональное созревание ДК нагруженных опухолевым антигеном [Weiner et al., 1997; Carpentier et al., 1999]. После стимуляции CpG ОДН в культуре лимфоцитов, В-лимфоциты пациентов с хроническим лимфолейкозом пролиферировали, секретировали цитокины, повышали экспрессию CD40, CD54, CD80, and CD86 [Decker et al., 2000; Jahrsdorfer et al., 2001]. CpG «В» и «А» типов используются как вакцинные адьюванты. Более выраженными свойствами обладает «В» тип ОДН. CpG ОДН «В» типа стимулирует синтез дендритными клетками ТЫ-зависимых цитокинов и хемокинов во вторичных лимфоидных органах, вызывая активацию цитотоксических Т-лимфоцитов [Lipford et al., 2000]. При подкожной иммунизации высокоспецифичным опухолевым антигеном, совместно с CpG, наблюдаются высокие титры антигенспецифических антител IgG2A, которые, во-первых, являются подтверждением развития ТЫ-зависимого ответа, во-вторых, IgG2A вызывают более выраженную активацию АЗКЦ,