Изучение липидных микродоменов (рафтов) лейкоцитов человека с помощью проточной цитометрии

• Автор: Шмиголь, Ирина Борисовна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 119 с. : ил + 105-119

Оглавление.

Список принятых сокращений
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. Обзор литературы.
1.1. Введение
1.2. Основная часть
1.2.1. Структура рафта
1.2.2. Белковый состав рафтов
1.2.3. Рафты - динамичные мембранные структуры
1.2.4. Размеры рафтов
1.2.5. Методы изучения рафтов
1.2.6. Функции рафтов
1.2.7. Липидные рафты и болезни человека
1.3. Заключение
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Материалы
2.1.1. Клетки и их источники
2.1.2. Антитела
2.1.3. Растворы, использованные в работе
2.1.4. Прочие реагенты и материалы, используемые в работе
2.2. Методы
2.2.1. Экстракция клеток раствором неионного детергента ТХ-
2.2.2. Экстракция клеток в растворах различных детергентов
2.2.3. Цитофлуориметрический тест
2.2.4. Обработка клеток проназой
2.2.5. Обработка клеток метил-(3 циклодекстрином
2.2.6. Обработка клеток цитохалазином Б
2.2.7. Определение резистентности поверхностных антигенов лейкоцитов человека к действию ТХ-
2.2.8. Определение резистентности поверхностных антигенов к действию различных детергентов
2.2.9. Детекция образцов с помощью проточной цитометрии
2.2.10. Обработка результатов экспериментов
2.2.11. Измерения с помощью конфокальной микроскопии
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований.
3.1. Отработка методики получения клеточных остатков
3.2. Собственная ТХ-100 резистентность поверхностных антигенов
3.3. Сравнение детергентной резистентности поверхностных антигенов на различных мишенях
3.4. Определение локализации высокорезистентных антигенов
3.5. Солюбилизация поверхностных антигенов в разных детергентах
3.6. Влияние метил-р-циклодекстрина на резистентность поверхностных антигенов
3.7. Приобретенная резистентность поверхностных антигенов к действию Тритона Х-100.
3.7.1. Антитело-индуцированная резистентность поверхностных антигенов
3.7.2. Индукция другими лигандами
3.8. Эксперименты по коиндукции
3.9. Коиндукция СБ20 и НЬА-ТЖ
3.10. Анализ антитело-опосредованной резистентности
3.11. Изучение влияния на антитело-опосредованную резистентность агентов, модифицирующих мембранные микродомены.

3.11.1. Действие метил-Р-циклодекстрина на антитело-индуцированную резистентность
3.11.2. Влияние В г у 58 на индукцию резистентности
3.12. Участие компонентов цитоскелета в антитело-индуцированной
резистентности
ГЛАВА 4. Обсуждения полученных результатов.
4.1. Клеточные остатки - подходящий объект изучения рафтов с помощью
проточной цитометрии
4.2 Собственная резистентность поверхностных антигенов к действию детергента ТХ-
4.3. Сравнение резистентности антигенов на различных клетках мишенях
4.4. Определение локализации ТХ-100 резистентных антигенов лейкоцитов человека
4.5. Солюбилизация антигенов в разных детергентах
4.6. Приобретенная резистентность поверхностных антигенов к действию ТХ-
4.7. Коиндукция разных антигенов
4.8. Анализ антитело-опосредованной резистентности
4.9. Участие компонентов цитоскелета в механизме антитело-индуцированной ТХ-100 резистентности поверхностных антигенов
4.10. Заключение
ВЫВОДЫ
Список использованной литературы

Trypanosoma и Leishmania. Было показано, что выделенные из этих микроорганизмов GPI-заякоренные белки, инициируют внутриклеточную сигнализацию в макрофагах организма хозяина [131].
Многие онкогены и опухолевые супрессоры являются белками, участвующими в процессах внутриклеточной сигнализации. Они способствуют канцерогенезу, когда происходит изменение или потеря их нормальной функции. Так, например, обычно для уменьшения сигнализации посредством EGF (эпидермальный фактор роста) требуется интернализация EGF рецепторов путем клатрин-зависимого эндоцитоза [132]. Онкогенные формы EGF рецепторов не участвуют в передаче сигнала внутрь клетки таким образом. Они остаются в липидных рафтах неестественно продолжительный период времени [133]. Вполне возможно, что именно это приводит к нерегулируемой стимуляции EGF сигналинга, что в свою очередь способствует трансформации клетки.
Существуют некоторые доказательства того, что структура и функция липидных рафтов значительно изменяется при раковой опухоли. Обращает на себя внимание то факт, что нормальные и опухолевые клетки отличаются друг от друга по составу и уровню экспрессии сфинголипидов [134].
Различие в экспрессии или локализации GPI-заякоренных белков также может играть роль в развитии патологии. Например, в гематопоэтических клетках у пациентов, страдающих ночной пароксизмальной гемоглобинурией, отстствует способность к синтезу GPI-якорей. Это приводит к тому, что пораженные клетки не экспрессируют на своей поверхности GPI-заякоренные белки, которые являются основным белковым компонентом рафтов. Оказалось, что клетки больных этой формой гемоглобинурии имеют преимущество в росте над нормальными клетками, возможно, благодаря увеличению их устойчивости к апоптозу. Кроме того, эти пациенты более подвержены лейкемии [135].