Роль нарушений межклеточных взаимодействий в патогенезе миелотоксического действия ксенобиотиков антрациклинового ряда

• Автор: Успенская, Юлия Александровна
• Шифр специальности: 14.00.16
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 245 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Г лава 1. Обзор литературы

1.1. Современные представления о механизмах цитотоксического действия ксенобиотиков. Окислительный стресс. Краткая характеристика цитотоксических эффектов модельного ксенобиотика доксорубицина
1.2. Регуляция пролиферативной активности клеток костного мозга и запрограммированной клеточной смерти. Роль их нарушений в механизме экзогенных интоксикаций
1.3. Роль межклеточных взаимодействий в регуляции гемопоэза. Щелевые контакты как форма прямого взаимодействия клеток
1.4. Аутокринная и паракринная регуляция клеточной активности метаболитами (АТФ, НАД+)

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Экспериментальные животные

2.2. Выделение и культивирование клеток костного мозга ш itro

2.3. Исследование пролиферативного статуса клеток костного мозга методом диффузионных камер іп уіуо
2.4. Определение продуктов перекисного окисления липидов в суспензии клеток костного мозга
2.5. Определение концентрации АТФ в клетках костного мозга и внеклеточном пространстве
2.6. Определение концентрации НАД+ в клетках костного мозга и внеклеточном пространстве
2.7. Оценка цитотоксичности доксорубицина в МТТ-тесте
2.8. Изучение процессов апоптоза клеток, культивируемых в диффузионных камерах

2.9. Исследование миелограммы
2.10. Детекция апоптоза и некроза в препаратах клеток костного мозга
2.11. Регистрация блеббинга плазматической мембраны клеток костного мозга
2.12. Оценка экспрессии CD38 на клетках костного мозга
2.13. Оценка экспрессии Р2Х7 на клетках костного мозга
2.14. Оценка экспрессии коннексина 43 (Сх43) на клетках костного мозга
2.15. Статистическая обработка результатов
Г лава 3. Результаты собственных исследований
3.1. Реализация цитотоксического потенциала доксорубицина in vitro
и in vivo при различных режимах воздействия
3.2. Изменение экспрессии молекул межклеточной коммуникации в клетках костного мозга при действии доксорубицина
3.3. Нарушение пуринергической регуляции функционирования клеток костного мозга при действии доксорубицина
3.4. Нарушение гомеостаза НАД+ в клетках костного мозга при действии доксорубицина
3.5. Особенности реализации цитотоксической активности доксорубицина при направленной модуляции механизмов, регулирующих межклеточные взаимодействия в костном мозге
Г лава 4. Обсуждение полученных результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы

Список сокращений
АДГ-АДФ -АИФ -АМФ-АТФ -Г-1-ГИМ-ГТФ-
днк-
док-
ИЛ-1 (2-7,
9,11,13)-
ИПРФ-
ИФ3-
КлОС-
КОЕ-
КОС-
КСФ-

мпд-
мРНК
мтт-
НААДФ
НАД-
НАДН-
НАДФ-
НАДФН-
НИК-
ПАРП-
ПОЛ-
ПСКК-
РНК-

ТФРр-
ФИТЦ-
ФНО-
алкогольдегидрогеназа аденозиндифосфат апоптоз-индуцирующий фактор аденозинмонофосфат аденозинтрифосфорная кислота гемопоэтин
гемопоэзиндуцирующее микроокружение гуанозинтрифосфат дезоксирибонуклеиновая кислота доксорубицин
интерлейкин-1 (2-7, 9, 11, 13)
инсулиноподобный фактор роста инозито лтриф осфат кластерообразующая способность
колониеобразующая единица (КОЕ-ГЭММ - гранулоцито-эритроидно-макрофагально-мегакариоцитарная, КОЕ-Н -недифференцированная, КОЕс - селезеночная колониеобразующая единица) колониеобразующая способность
колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ - гранулоцито-макрофагальный, Г-КСФ - гранулоцитарный, М-КСФ -макрофагальный колониестимулирующие факторы) малоновый диальдегид максимально переносимая доза матричная РНК
3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид
никотинатадениндинуклеотидфосфат
никотинамидадениндинуклеотид
восстановленный никотинамидадениндинуклеотид
никотинамидадениндинуклеотидфосфат
восстановленный никотинамидадениндинуклеотидфосфат
никотинамид
полиАДФ-рибозилполимераза
перекисное окисление липидов
полипотентная стволовая кроветворная клетка
рибонуклеиновая кислота
тиобарбитуровая кислота
трансформирующий фактор роста [3
флуоресцеин-изотиоцианат
фактор некроза опухолей (ФНОа - а, ФНОр - (3)

детерминированная программа клеточного «самоубийства» [54]. Об этом свидетельствует участие ряда генов в реализации этой программы, контролирующих инициальные этапы клеточной смерти («гены гибели») и блокирующих апоптотическую гибель («гены выживания») [407]. Будучи генетически запрограммированным процессом [67], апоптоз лежит в основе таких механизмов, как эмбриогенез и метаморфоз, позитивная и негативная селекция Т- и В-лимфоцитов [107], действие цитотоксических лимфоцитов на клетки-мишени, гибель иммунокомпетентных клеток, индуцированная глюкокортикостероидами [112], инволюция эндокринной ткани, смерть клеток при отсутствии специфических ростовых факторов [67,226].
Апоптоз характеризуется ранним снижением адгезивных свойств клеток, уменьшением их объема, конденсацией хроматина, кариорексисом и кариопикнозом [75, 212], межнуклеосомной фрагментацией ДНК вследствие активации кальций-магний-зависимых эндонуклеаз [18], отсутствием высвобождения лизосомальных ферментов и воспалительной реакции, сохранностью клеточных мембран вплоть до заключительной стадии, включающей в себя формирование апоптотических телец (фрагменты конденсированного ядерного материала и цитоплазмы, окруженные мембраной с экспрессированными на ней новыми сигнальными молекулами) [85, 407] и фагоцитоз их рядом расположенными клетками [54, 67, 271]. При этом межнуклеосомная фрагментация ДНК рассматривается в качестве механизма, предотвращающего перенос патологически измененной генетической программы в процессе фагоцитоза апоптотических телец [361]. Кроме того, апоптоз носит энергозависимый характер, ингибируется веществами, подавляющими синтез РНК или белка в клетке [375]. Обнаружено большое количество экзогенных и эндогенных факторов, вызывающих развитие апоптоза в различных клетках при определенных условиях воздействия [68, 219] или подавляющих его [68, 323].