Продукция оксида азота лейкоцитами и тромбоцитами здоровых доноров и больных с метаболическим синдромом

• Автор: Огуркова, Оксана Николаевна
• Шифр специальности: 14.00.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 115 с. : 5 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Сахарный диабет 2 типа как максимальное проявление синдрома резистентности к инсулину
1.2.Инсулинорезистентность как основной патогенетический механизм метаболического синдрома
1.3. Влияние инсулинорезистентности на функциональное состояние моноцитов, полиморфноядерных лейкоцитов и тромбоцитов крови
1.4. Механизмы продукции оксида азота моноцитами, полиморфноядерными лейкоцитами и тромбоцитами
1.5. Нарушение продукции оксида азота моноцитами, полиморфноядерными лейкоцитами и тромбоцитами при метаболическом синдроме
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ГЛАВА 2: МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Выделение мононуклеарных и полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови
2.2. Культивирование моноцитов и полиморфноядерных лейкоцитов крови
2.3. Определение оксида азота в супернатантах культивируемых моноцитов и полиморфноядерных лейкоцитов крови
2.4. Выделение тромбоцитов периферической крови
2.5. Получение оксигемоглобина
2.6. Определение оксида азота в суспензии тромбоцитов
2.7. Определение показателей липидного обмена
2.8.Определение параметров углеводного обмена
2.9. Определение инсулина в сыворотке крови
2.10. Определение С-пептида в сыворотке крови
2.11. Определение концентрации мочевой кислоты
2.12. Статистическая обработка полученных результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ НАБЛЮДЕНИЙ
3.1. Клиническая характеристика групп больных метаболическим синдромом
3.2. Показатели углеводного и пуринового обменов у больных с метаболическим синдромом и в группе здоровых доноров
3.3. Показатели липидного обмена у больных метаболическим синдромом и в группе здоровых доноров
3.4. Содержание инсулина и С-пептида у больных метаболическим синдромом и в группе здоровых доноров
3.5. Исследование содержания стабильных метаболитов оксида азота в супернатанте клеточной культуры моноцитов
3.6. Исследование содержания стабильных метаболитов оксида азота в супернатанте клеточной культуры полиморфноядерных лейкоцитов
3.7. Изучение продукции оксида азота тромбоцитами здоровых доноров и
больных метаболическим синдромом
ГЛАВА 4.0БСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Взаимосвязь компонентов метаболического синдрома
4.2. Показатели углеводного и пуринового обменов у больных с метаболическим синдромом
4.3. Показатели обмена липидов у больных с метаболическим синдромом
4.4. Содержание инсулина и С-пептида в сыворотке крови больных метаболическим синдромом
4.5. Влияние инсулина на продукцию оксида азота моноцитами здоровых доноров и больных метаболическим синдромом
4.6. Влияние инсулина на продукцию оксида азота полиморфноядерными лейкоцитами здоровых доноров и больных с метаболическим синдро-

4.7. Изучение продукции оксида азота тромбоцитами здоровых доноров и
больных метаболическим синдромом
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

рически при 550 нм. Калибровочную кривую строили с использованием раствора NaNCb концентрацию выражали в нмоль N02' /мл /106 клеток.
2.4. Выделение тромбоцитов периферической крови
Выделение тромбоцитов проводили, как описано [54, 73], 10 мл венозной крови собирали в пробирку с 6% ЭДТА и центрифугировали 15 минут 1400 об/мин. Богатую тромбоцитами плазму собирали в чистую пробирку и центрифугировали 5 минут 3000 об/мин для осаждения клеток. Тромбоциты трижды отмывали фосфатным буфером (pH 7,2), ре суспендировали в 1 мл раствора Хенкса. Число тромбоцитов подсчитывали в камере Горяева по общепринятому методу. Концентрация в пробе составляла 108 клеток/мл.
2.5. Получение оксигемоглобина
Оксигемоглобин готовили как описано [73]. Гемоглобин человека (“Sigma”, США) смешивали с дитионатом натрия (“Sigma”, США) и хроматографировали через колонку с сефадексом G-25 (“Pharmacia”, Sweden). Ярко красную фракцию оксигемоглобина отбирали, разливали в пробирки и хранили при -20°С. Концентрацию гемоглобина определяли при 7=415 нм, коэффициент экстинции 131000 М'‘см'’.
2.6. Определение продукции оксида азота в суспензии тромбоцитов и по-лиморфноядериых лейкоцитов
Определение образования оксида азота проводили как изложено [73, 121]. Метод основан на конверсии оксигемоглобина в метгемоглобин оксидом азота и изменении абсорбции при 577 нм. В кювету в 50 мМ К-фосфатный буфер добавляли тромбоциты в концентрации 108 клеток/мл. В качестве ингибитора NO-синтазы использовали 100 мкМ L-NMMA (N“-monomethyl-1-arginine). В качестве индукторов продукции оксида азота добавляли 0,34 нМ инсулина (“Sigma”, США), адреналин и АДФ в концентрации 5 мкг/мл (“Технология-Стандарт”, Россия).
Расчет продукции оксида азота проводили, оценивая снижение абсорбции оксигемоглобина при 7=577 нм, коэффициент экстинции 11 200 М~‘см'1 и выражали в пмоль NO/мин/! О8 клеток.