Создание конструкции иммунолипосомы и изучение иммунолипосомальной формы противоопухолевого препарата "Доксорубицин"

• Автор: Толчева, Елена Викторовна
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 0 с. : 109 ил.

Оглавление
Введение

Часть L Обзор литературы

Глава 1. Липосомы: строение, свойства и области их применения

Глава 2. Липосомы как средство доставки биологически активных молекул

к клеткам-мишеням

Глава 3. Лиганды для направленного транспорта липосом

Глава 4. Модификация поверхности липосом

Часть II Собственные исследования

Глава 1. Материалы и методы исследования

Глава 2 Получение лиганд-полиэтиленгликоль-липидного коньюгата

Глава 3 Получение 1СО80-иммунолипосом, нагруженных
доксорубицином
Глава 4 Проверка специфической активности 1СО80-иммунолипосом,
нагруженных доксорубицином, в системе in vitro
Выводы
Список литературы

Введение
Актуальность проблемы
Использование липосом для транспорта и целенаправленной доставки
противоопухолевых препаратов - цитостатиков является одним из перспективных направлений в медицине. Применение цитостатиков для лечения онкологических больных часто сопровождается токсическими осложнениями, обусловленными поражением быстро обновляющихся, с высоким темпом пролиферации клеток кроветворных и иммунокомпетентпых органов (в первую очередь костного мозга, эпителия желудочно-кишечного тракта, сердечной мышцы, почек и др.). Кроме того, малое непосредственное влияние на опухолевый рост также ограничивает использование цитостатиков в свободном виде. Данные, накопленные специалистами за последние годы подтверждают способность липосом транспортировать лекарственное средство, снижать его токсическое действие, увеличивать терапевтический эффект [5;7].
Для обеспечения направленного транспорта липосом к клеткам-мишеням было предложено модифицировать поверхность липосом различными лигандами, способными специфически связываться с антигенами или рецепторами на поверхности клетки. Выбор лиганда зависит от антигена/рецептора, экспрессированного на поверхности клетки, куда необходимо доставить липосомы В качестве векторных молекул могут выступать, например, моноклональные антитела (МКА) или их фрагменты (РаЬ'-фрагменты МКА). пептиды, факторы роста, углеводы, гликопротеины, лиганды к специфическим рецепторам на поверхности клеток-мишеней и др. Липосомы. к поверхности которых присоединены МКА или РаЬ'-фрагменты МКА. назвали иммунолипосомами [19].
Согласно литературным данным. присоединение лиганда к поверхности липосомы осуществляется посредством одной из трех реакций, которые являются достаточно эффективными и избирательными. Это реакция между активированными карбоксильными группами и
аминогруппами, в результате которой образуется амидная связь; реакция между пиридилдитиолами и тиолами, в результате чего образуются дисульфидные связи; реакция между малеимидными производными и тиолами. в результате которой формируются тиоэфирные связи [63]. Кроме того, для присоединения лигандов к липосомальной поверхности может быть использован метод нековалентного связывания - через образование комплекса биотин - авидин/стрептавидин [63; 127]. Все перечисленные методы требуют предварительной модификации лиганда, что может снижать его специфическую активность. Методы ковалентного присоединения, не требующие предварительной модификации лиганда, являются предпочтительными, так как значительно упрощают процесс получения «адресных» липосом, делая его одностадийным. К таким методам относится присоединение лиганда, содержащего МН2-группу, к п-нитрофениловому эфиру ПЭГ-липидного коньюгата [147] или к цианурхлоридной производной ПЭГ-липидного коньюгата [34]. Однако конечный выбор метода присоединения определяется доступностью активированной липидной или полиэтиленгликоль-липидной производной и молекулярными особенностями лиганда.
В связи с вышесказанным, актуальной задачей является разработка методики получения активированного полиэтиленгликоль-липидного коньюгата и создание на его основе универсальной конструкции «адресных» липосом, позволяющей в одну стадию присоединять к концам цепей полиэтиленгликоля на поверхности липосом лиганды, содержащие аминогруппы (например, белки или пептиды), без их предварительной модификации.
Цель исследования
Целью исследования являлось создание конструкции иммунолипосомы
и изучение иммунологической специфичности и цитотоксической активности иммунолипосочальной формы противоопухолевого препарата доксорубицин.

13). образованной при расщеплении дисульфидного мостика шарнирного участка Р(аЬ’)2-фрагмента антител (Рис. 12).

F(abh
F(ab )
Рис 12. Схематическое изображение получения Fab'-фрагментов антител.
SH -f Liposomes DOPE PEG-NH <
Ffesb) MPB-PEG-PELiposomes

SH >- NH PEG-DOPE Liposomes

Иммунопипосоыы
Рис 13 Схематическое изображение реакции присоединения Fab'-фрагментов антител к малеимидной производной ПЭГ-липида.
В качестве альтернативы. Fab‘-фрагменты антител с концевыми тиольными группами могут быть присоединены к липосомам через пиридилдитиопропиониламино-ПЭГ-липид [132], встроенный в липосомальный бислой, путем образования дисульфидной связи (Рис. 14)