Иммунорегуляторные аспекты взаимодействия Т-клеточного рецептора с естественными и искусственно синтезированными лигандами

• Автор: Побезинский, Леонид Александрович
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 151 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ

ГЛАВА 1. Мыши ММ14.

1.1 Получение трансгенных мышей

1.1.1 Получение Т клеточных гибридом

1.1.2 Определение и клонирование TCR ММ14.

1.1.3 Специфичность ММ14.

1.1.4 Линии мышей трансгенных по TCR
1.2 Дифференцировка клеток CD4 и CD8 у мышей, экспрессирующих TCR ММ14.
1.2.1 Зависимость селекции Т клеток ММ14.4+
от молекул МНС классов I и II
1.2.2 Оценка зависимости позитивной селекции Т клеток ММ14.4 от специфического пептида. . .
1.3 Специфичность и функциональность клеток CD4+ и CD8+ у мышей ММ14.
1.3.1 Субпопуляция клеток CD4+
1.3.2 Субпопуляция клеток CD8+
1.3.3 Влияние позитивной и негативной селекции на распознавание продуктов МНС клетками MM14.4+CD4+ и MM14.4+CD8+
1.4.(1) Влияние ко-рецепторов на распознавание
антигенов клетками мышей ММ14.
1.4.2 Роль ко-рецептора CD4 в распознавании
молекул МНС класса I
1.5 Аутоиммунные заболевания у мышей ММ14.
1.5.1 Псориазоподобное заболевание
1.5.2 Лимфопролиферативное заболевание
1.6 Насколько исключителен TCR ММ14.4?
ГЛАВА 2. Поиск и анализ рецепторов с двойной специфичностью к молекулам МНС классов I и II в пуле клеток CD4+ у мышей АьЕр и дикого типа
2.1 Т клетки с двойной рестрикцией у мышей АьЕр. . . .
2.1.1 Получение и тестирование Г клеточных гибридом
2.2 Т-клетки CD4+ с двойной рестрикцией у мышей дикого типа
2.2.1 Получение и тестирование Т клеточных гибридом.
2.2.2 Определение и клонирование TCR.1G
ГЛАВА 3. Поиск и анализ TCRs с двойной специфичностью
к молекулам МНС классов I и II в пуле клеток
CD8+ у мышей дикого типа
3.1 Получение и тестирование Т клеточных гибридом
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Введение
В последние годы знания об иммунной системе пополнились новыми фундаментальными представлениями, которые позволяют лучше понять ее работу и связать воедино накопленный фактический материал. По современным представлениям иммунный ответ можно разделить на врожденный и адаптивный. В отличие от врожденного иммунитета, адаптивная иммунная система использует уникальные рецепторы, которые формируются в ходе случайной соматической реаранжировки иммуноглобулиновых генов. В этом случае в ответе принимают участие лимфоциты двух типов - Т-клетки и В-клетки.
Клеточный адаптивный иммунный ответ опосредован действием Т-клеток, которые проходят основные этапы своего развития в тимусе. Основная функция иммунитета - это защита организма хозяина от агрессии чужеродных форм жизни. Кроме того, иммунитет осуществляет внутренний контроль, который выражается в выявлении и устранении клеток, экспрессирующих измененные антигенные детерминанты. Чтобы приобрести способность к этому, Т-клетки проходят стадии позитивной и негативной селекции в тимусе, где выживают только те из них, которые способны распознавать свои антигены в контексте молекул МНС с промежуточной аффиностью. Таким образом, Т-клетки становятся способными отличать свои антигены от чужих.
С одной стороны, селекция приводит к делеции Т-клеток, которые могут вызвать ответ на собственные антигены, что делает бесперспективными попытки создания противоопухолевых вакцин, стимулирующих ответ на опухолеассоциированные антигены. В связи с тем, что периферический пул Т-клеток несет "отпечаток" тимусной селекции, изучение принципов внутритимусного развития Т- клеток является первоочередной задачей онкоиммунологии. Понимание
закономерностей позитивной и негативной селекции позволит

другую модель, Rudensky показал, что даже очень небольшая "примесь" дополнительных пептидов играет важную роль в позитивной селекции [Barton, G. М. et al. , 1999]. Чтобы создать систему, в
которой количество посторонних пептидов будет сведено до минимума, автор использовал трансгенную конструкцию II, где вместо пептида CLIP был вставлен пептид рЕа.52-68. Кроме того, такой трансген был переведен на генетическую основу мышей, дефицитных по экспрессии эндогенных молекул Н-2М и II. Таким образом, эти исследования показали, что далеко не все Т-клетки могут проходить позитивную селекцию на одном комплексе молекула МНС-пептид (АьЕр). В подтверждение этого говорит тот факт, что многие Т-клетки, трансгенные по TCR, не способны селектироваться у мышей дефицитных по экспрессии Н-2М [Grubin, C. E. et al. , 1997; Surh, C. D. et al. , 1997] . Кроме того, у мышей, дефицитных
по экспрессии Н-2М, и у трансгенных мышей А°Ер при наличии трансгенной ß-цепи TCR исследователи обнаружили искажённый репертуар a-цепей TCR, а именно ограниченный набор последовательностей Va и изменение длины петель CDR3 [Fukui, Y. et al., 1998; Sant'Angelo, D. В. et al. , 1997]. Таким образом,
дальнейшее ограничение системы (фиксирование ß-цепи TCR) не приводит к дальнейшему сокращению репертуара TCR, что свидетельствует о том, что требования Т-клеточных рецепторов к селектирующему пептиду одинаковы.
Негативная селекция и аутоиммунитет:
Основная задача иммунной системы организма - это отличить чужеродные антигены от своих собственных. Изучение специфичности Т-клеточной селекции является центральной проблемой в понимании механизмов адаптивной иммунной системы и аутоиммунитета. Уже неоднократно отмечалось, что Т-клетки имеют врожденную