Совершенствование генетической структуры стада крупного рогатого скота по локусу BoLA DRB 3 как фактор оздоровления от лейкоза

• Автор: Якушева, Людмила Ивановна
• Шифр специальности: 06.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Краснодар
• Количество страниц: 109 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Е ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Состояние структуры поголовья коров молочного направления
продуктивности в Краснодарском крае
1.2. Полиморфизм локуса ВоБА ОЯВ 3, методы его выявления и
возможность использования в селекции молочного скота
1.3. Лейкоз крупного рогатого скота, этиология и методы диагностики
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Выделение ДНК
2.2. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР)
2.3. Анализ полиморфизма длин фрагментов рестрикции (ПДРФ)
2.4. Электрофорез
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Анализ работы отрасли молочного скотоводства в ОАО «Племзавод «Дружба» Калининского района
3.2. Изучение генетической структуры стада по локусу ВоЬА ПЯВ
3.3. Характеристика быков - производителей, использовавшихся в
хозяйстве
3.4. Подбор быков - производителей с использованием информации
по локусу ВоЬА ОЯВ
3.5. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота с использованием
полимеразной цепной реакции
3.6. Генеографические исследования вируса лейкоза крупного рогатого скота
3.7. Экономический эффект использования молекулярнобиологических методов в молочном скотоводстве
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ
ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

ВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Проблема лейкоза крупного рогатого скота является приоритетной для молочного скотоводства России (Гулюкин М.И., Симонян Г.А., Шишкин A.B., 2004). Существует как минимум два альтернативных подхода для повышения эффективности традиционных противолейкозных мероприятий: разработка методов эффективной ранней диагностики (Макаров В.В., Гринишин Д.П., 2005) и использование в селекционной практике признака устойчивости к персистентному лимфоцитозу (Сулимова Г.Е., Удина И.Г., Шайхаев Г.О., Захаров И.А., 1995).
Известно, что разные аллели гена BoLA DRB 3 играют не одинаковую роль в формировании устойчивости животных к персистентному лимфоцитозу, вызываемому вирусом лейкоза крупного рогатого скота (Levin H.A., Wu М.С., Steward J.A., 1988; Van Eijk M.J.T., Stewart - Haynes J.A., Beever J.E., 1992; Xu A., Van Eijk M.J.T., Park Ch., 1993; Mirsky M.L., Lewin H.A., 1998). Доказано, что животные, несущие аллели *11, *23, *28 - устойчивые (У), не склонны к переходу лейкоза в стадию персистентного лимфоцитоза, а животные, несущие в своем генотипе аллели *8, *16, *22, *24
чувствительные (Ч), напротив, чаще других оказываются в выборке больных. Нейтральные (Н) аллели не ассоциируются ни с устойчивостью, ни с чувствительностью к персистентному лимфоцитозу.
Внедрение новых подходов в практику требует проведения широкого спектра исследований, направленных на оценку их прикладной значимости.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение роли и результативности применения молекулярно - биологических методов в селекционной работе, для повышения резистентности крупного рогатого скота, и в ранней диагностике лейкоза.
Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи:
- проанализировать генетическую структуру стада айрширской породы по

локусу ВоЬА БЯВ З и определить частоту встречаемости аллелей, ассоциированных с устойчивостью к развитию лейкоза;
- путём соответствующего подбора быков - производителей, создать ВоЬА БИВ 3 генетическую структуру стада крупного рогатого скота айрширской породы с усиленной генетической составляющей устойчивости к персистентному лимфоцитозу;
- разработать схему эффективной ранней диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) на основе использования ДНК - анализа;
- определить экономическую эффективность использования молекулярно -биологических методов.
Научная новизна исследований состоит в том, что создана новая ВоЬА БИВ 3 генетическая структура стада крупного рогатого скота айрширской породы с повышенной частотой встречаемости аллелей, ассоциированных с устойчивостью к развитию лейкоза.
Разработана и апробирована диагностическая схема с использованием ДНК - анализа, эффективно позволяющая оздоравливать хозяйство от лейкоза крупного рогатого скота.
Практическая значимость и реализация результатов исследований
основании генотипирования по гену ВоЬА БЇШ 3 разработан способ подбора быков - производителей, направленный на повышение в стаде доли животных, с высоким уровнем устойчивости к персистентному лимфоцитозу. С использованием диагностической схемы, разработанной в ходе выполнения диссертационной работы, показана результативность выявления в раннем возрасте телят - носителей ВЛКРС.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
-создание новой ВоЬА БЯВ 3 генетической структуры стада крупного рогатого скота айрширской породы с повышенной устойчивостью к персистентному лимфоцитозу;

Гематологический метод позволяет диагностировать лейкоз на более ранних стадиях развития заболевания. Сущность его заключается в обнаружении в периферической крови повышенного числа лейкоцитов (в основном лимфоидного ряда), слабо дифференцированных клеток, а также полиморфных, атипичных клеток кроветворных органов.
Серопозитивных животных с двухлетнего возраста следует (согласно инструкции от 04.06.1999.) исследовать гематологически. Как сообщают Г.А. Симонян, Ф.Ф. Хисамутдинов (1995), Н.И. Петров (1997), эта стадия лейкозного процесса характеризуется более постоянными изменениями количественного и качественного состава периферической крови в виде абсолютного лимфоцитоза и наличием единичных малодифференцированных клеток.
Гематологические исследования способствуют более углубленному изучению патологических процессов в организме при гемобластозах. Лейкоз включают в себя лимфоидный, миелоидный, недифференцированный, неклассифицированный (гемоцитобластоз) лейкоз, злокачественный
гистиоцитоз (Симонян Г. А., Хисамугдинов Ф.Ф., 1995). Длительное
бессимптомное течение лейкоза у крупного рогатого скота и многочисленное поражение животных происходит в гематологической стадии
(Нахмансон В.М., 1986). Изменения в периферической крови отражают почти все патологические процессы, протекающие в организме явно и скрыто.
Морфологическое исследование крови играет большую роль при заболеваниях кроветворной системы. Сущность ее заключается в оценке двух показателей белой крови (количество лейкоцитов в 1 мкл крови и процент лимфоцитов в лейкограмме). Подсчет лейкоцитов проводят при помощи электронного счетчика или в камере Горяева, а процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов крови в окрашенном мазке под микроскопом. Результаты гематологических исследований оценивают по так называемому лейкозному ключу и морфологическому характеру клеток крови.
Сравнительно значимые изменения в показателях белой крови наблюдают в