Усовершенствование метода диагностики нозематоза медоносных пчел

• Автор: Чернышев, Алексей Анатольевич
• Шифр специальности: 06.02.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 106 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
2. Обзор литературы
2.1. Возбудители заболевания
2.2. Патогенез
2.3. Клиническая картина заболевания
2.4. Методы диагностики
2.5. Меры борьбы и профилактика заболевания
3. Материалы и методы исследований
4. Результаты собственных исследований
4.1. Изучение эпизоотической ситуации по нозематозу на пасеках Московской области в период 2009-2011 гг
4.2. Разработка метода полимеразной цепной реакции для видовой идентификации возбудителей нозематоза пчел
4.3. Влияние микроспоридии Моэета сегапае на жизнедеятельность и продуктивность семей пчел
4.4. Разработка мер по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках
5. Обсуждение результатов исследований
6. Выводы
7. Предложения для практики
8. Список литературы
Приложения

Введение
Нозематоз - инфекционное заболевание взрослых пчел, маток и трутней, вызываемое микроспоридией рода Nozema, паразитирующей в эпителиальных клетках средней кишки. До недавнего времени данный возбудитель относился к типу простейших, современная систематика микроспоридии рода Nozema относит его к царству грибов. Сейчас выделено два возбудителя данного заболевания - это давно известная Nosema apis (Zander E., 1909) и сравнительно недавно изученная Nosema ceranae (Fries I., et al., 1996).
В настоящее время во многих странах мира отмечается нарастание массовой гибели пчелиных семей неустановленной этиологии. Так называемый молниеносный коллапс (синдром массовой гибели пчел) многие авторы связывают с нарастанием инфекции медоносных пчел, вызываемой микроспоридией Nosema ceranae (Fries I., Martin R., Higes M., 2006; Garcia P., Martinndez R., 2007; Meana A., 2007; Homitzky M., 2008; Chen Y., Pettis J. 2008). Этот вид ноземы был впервые выделен в 1996 г. (T. Fries et al.,) из горных китайских пчел Apis cerana. Заболевание нозематозом медоносных пчел, вызываемое микроспоридией Nosema apis (Zander, 1909) хорошо изучено и описано в литературе (Fries I., Fen F., 1996; Meloun L., Geythaus H., 2001; Flatjina F., Haristis L., 2005 ).
Видовая идентификация возбудителей нозематоза затруднена, так как морфологические различия Nozema apis и Nosema ceranae незначительны и не могут быть установлены при использовании традиционных методов исследования. С этой целью применяют специальные методы исследования: электронную микроскопию и молекулярно-генетические методы, в частности полимеразную цепную реакцию (ПЦР) (Blanchard P., Ribieri М., Celle О., 2007; Hornitzky М., 2008; Giersch Т., Galey F., 2009). В последние годы нозематоз принимает прогрессирующие формы распространения на пасеках России и наносит значительный экономический ущерб пчеловодству. Это вызывает

необходимость разработки мер по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках.
Единственным специфическим препаратом для лечения и профилактики нозематоза пчёл является препарат - фумагиллин-ДЦГ (производство Венгрия), фумидил-В (производство США). Действие фумагиллина выражается в задержке и разрушении вегетативных стадий ноземы. Фумагиллин подавляет репликацию ДНК у паразитов, на ДНК клеток пчелы препарат действия не оказывает (Higes М., Fries I., 2006). Однако в 2002 году решением Европейской комиссии фумагиллин запрещен к применению в качестве лечебного препарата в пчеловодстве (решение ЕС 3/01/081 от 04.02.2002г.). Аналог фумагиллина-ДЦГ в США фумидил-В с успехом применяется для лечения нозематоза пчел. Фумидил-В до сих пор применяется в США (Fries I., 2007). В нашу страну данный препарат не поступает.
В 1997 году на территории РФ зарегистрирован патент № 2081572 «Состав для борьбы с нозематозом пчел Нозесон» (А.М. Смирнов, Р.Т. Клочко, А.Б. Сохликов, и др.). Нозесон включает в себя: соль фумагиллиновой кислоты, алифотического амина, аскорбиновой кислоты, натрия сернокислого, поливинилперролидона при соответствующих соотношениях. Данный препарат на территории РФ не выпускается.
В настоящее время производится выпуск отечественных препаратов для борьбы с нозематозом пчел, однако эти препараты симптоматического действия, которые устраняют только лишь симптомы заболевания, на самого возбудителя они не действуют.
В борьбе с нозематозом важную роль имеет разработка новых методов диагностики и профилактики заболевания.
Цель работы разработать метод видовой идентификации возбудителей нозематозной инфекции, а также определить меры по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках.
Для достижения этих целей были поставлены следующие задачи:

4. Результаты собственных исследований
4.1. Изучение эпизоотической ситуации по нозематозу на пасеках Московской области в период 2009-2011 гг.
Изучение эпизоотической ситуации по нозематозу на территории Московской области в период 2009-2011 гг. проводили на пасеках членов Московского общества пчеловодов-любителей, где отмечалась гибель пчелиных семей.
Мертвых пчел (подмор) в количестве 50-100 пчел от каждой пчелиной семьи, в лабораторных условиях помещали на фильтровальную бумагу, просматривали каждую пчелу с помощью лупы, отмечали наличие клещей Varroa destructor или других паразитов. Затем проводили диагностику на наличие микроспоридий рода Nosema. Всего исследовано 200 проб.
Результаты изучения эпизоотической ситуации по нозематозу на пасеках Московской области представлены в таблице 1.
Таблица
Результаты исследования проб пчел от погибших семей в период с 2009 г по 2011 г
Место отбора проб Обследованно семей пчел, шт Выявлены возбудители
Всего Выявлено погибших Взято проб nosema nosema + varroa varroa Невыясненная этиология
Можайский район 210 27 27 6
Одинцовский район 300 30 30 6
Балашихинский район 160 12 12 3
Раменский район 150 15 15 4
Ногинский район 240 29 29 6
Орехово- Зуевский 110 10 10 2
Коломенский 170 30 30 8 11 8 л 2)
Московская область 1340 153 153 35
Как видно из представленных данных, при обследовании 1340 пчелиных семей из 7 районов Московской области в период с 2009 г по 2011 г погибло