Влияние абиотических и биотических факторов на выживаемость и морфологию популяций листерий в объектах ветеринарно-санитарного надзора

• Автор: Власов, Артем Аркадьевич
• Шифр специальности: 06.02.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 105 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Сапрофитическое существование патогенных и условно-патогенных бактерий в различных экосистемах

1.1. Сапрофитическое существование бактерий рода Listeria в водной* среде

1.2. Контаминация бактериями рода Listeria продуктов питания;

1.3. Сапрофитическое существование листерий в почве и растениях

1.4. Влияние абиотических факторов на выживаемость листерий.

ГЛАВА 2. Биология листерий;

2.1. Виды бактерий рода Listeria
2.2. Идентификация листерий
ГЛАВА 3. Способы существования листерий в среде обитания;
3 .1. Адгезия и колонизация листерий на объектах окружающей среды
3.21 Гетероморфизм как форма существования,листерий
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ;
Г ЛАВА 4. Материалы и методы
4.1. Методы изучения влияния абиотических факторов на 32 выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua
4.1.1. Методы изучения влияния температуры на выживаемость и 32 морфологию популяций Listeria innocua
4.1.2. Методы изучения влияния растворов кластерного серебра на 32 выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua
4.2. Методы изучения влияния биотических факторов на выживаемость 34 и морфологию популяций Listeria innocua
4.2.1. Методы, изучения взаимодействия популяций Listeria innocua с 34 вегетативными органами растений и комбикормами
4.2.2. Методы изучения выживаемости и морфологии Listeria innocua в
молоке и молочных продуктах
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА 5. Выживаемость и морфология популяций Listeria innocua в 38 водной среде при различных температурах

ГЛАВА 6. Исследование морфологии популяций и выживаемости
Listeria innocua в молоке и молочных продуктах
ГЛАВА 7. Экспериментальное исследование взаимодействия кормовой
культуры овса с Listeria innocua
ГЛАВА 8. Экспериментальное исследование процессов атгезии и 60 колонизации Listeria innocua комбикормов
ГЛАВА 9. Исследование влияния растворов кластерного серебра на
выживаемость и морфологию популяций Listeria innocua
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
Актуальность проблемы. В настоящее время одним из современных направлений микробиологии является экология микроорганизмов, которая включает в себя раздел популяционной микробиологии, требующий глубокого понимания структурно-функциональных особенностей существования популяций различных микроорганизмов.
Изучению биологии, экологии, индикации и идентификации листерий посвящен целый ряд работ таких исследователей как Бакулов И.А. 1967, Меньшикова 1971, Бутко М.П. 1977, Шевелева С.А. 1999, Котлярова Г.А. 1989, Котляров В.М. 1999, Тартаковский И.С. 2002, Нитяга И.М. 2004 и другие.
В связи с участившимися случаями выявления возбудителя листериоза в объектах ветеринарно-санитарного надзора, в частности, в водоемах, кормах, продуктах питания, возникает необходимость детального исследования выживаемости и морфологических особенностей популяций листерий в указанных выше объектах.
В последнее время, наряду с психрофильными бактериями вида L. monocytogenes, свою экологическую нишу начинают занимать L. innocua. Как показывают последние исследования при выделении листерий из объектов окружающей среды, патологических и биологических материалов доля Listeria innocua часто составляет больше половины от общего числа видов листерий (Бакулов И.А., Егорова И.Ю. и др. 2009). Так, в период с 2006 по 2009 годы из пресноводной рыбы Иваньковского водохранилища листерии были выделены в 5,53 % проб, из них на долю L. monocytogenes приходилось 48 %, а на L.innocua - 52 % проб (Егорова И.Ю., Селянинов Ю.О. и др. 2009).
Особый интерес представляют данные о проявлении патогенных свойств L.innocua. Так, при постановке конъюнктивальной пробы на морских свинках со штаммами L.innocua, выделенными из свинины, говядины, сливочного масла, была отмечена положительная реакция и зафиксирована гибель нескольких животных, во внутренних органах которых при

каждый проросток помещали в стерильный стакан высотой 15 см и объемом 200 мл таким образом, чтобы в почве находились только корни проростков. Растения закрывали стерильным стеклянным колпаком и выращивали при температуре 18-20°С в течении двух недель (рис. 1.).
Взвесь клеток в концентрации 2x109 кл/мл (1 мл) вносили в стерильную почву (pH 7,0-7,2) стерильным шприцом строго в околокорневую зону, не касаясь корневых волосков растений.
Количественный учет листерий по КОЕ проводили путем периодических высевов гомогенатов вегетативных органов растений (корня и стебля раздельно) на МПА с 1% глюкозы и дифференциально-диагностическую среду для листерий фирмы Мерк. Инкубацию посевов проводили при 37°С в течение 2 суток. Пробы отбирали через 3, 7 и 14 суток. Идентификацию листерий проводили после каждого высева — на 3, 7 и 14 сутки опыта с помощью микроскопии, окрашенных по Граму препаратов. Кроме того, проводился тест на активность каталазы.
Параллельно, в целях исследования морфологии популяции листерий в растениях методом сканирующей электронной микроскопии, готовили препараты из корневых волосков и листьев овса. Для этого исследуемые фрагменты растений фиксировали 4%-м раствором глутарового альдегида на фосфатном буфере (pH - 7,0) с последующим обезвоживанием в восходящих концентрациях этилового спирта (50°, 70°, 96°, 100°). Объекты
препарировали после обезвоживания в 70° спирте путем снятия эпидермы (оболочки) листовой пластинки с помощью лезвия бритвы.
При изучении процессов адгезии и колонизации листерий на поверхности комбикормов нами были использованы следующие температурные режимы 37°С, 22°С (комнатная температура) и 4°С (холодильные камеры). Для постановки экспериментов комбикорм автоклавировали в течение 1 ч при 120°С. Частицы комбикорма, преимущественно дроблёное зерно, раскладывали на предметные стёкла в стерильные влажные камеры и наносили сверху капли бактериальной взвеси,