Фено-, генотипическая изменчивость бруцелл и разработка экспресс-метода оценки их иммуногенности

• Автор: Панкова, Екатерина Витальевна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 197 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ -антиген

АТ -антитело

АТЭ -антиген термоэкстракт

БНМ -белки наружной мембраны

БСБ -белковые спектры бруцелл

ДМСО -деметилсульфоксид

ДНК -дезоксирибонуклеиновая кислота

ИЛ -интерлейкин

ИФА -иммуноферментный анализ

ИНФ -интерферон
ИВС -индекс веса селезенки
кД -килодальтон
кдо -кетодезоксиоктолузоновая кислота
КСФ -колониестимулирующий фактор
лпс -липополисахарид
ЛЭК -легкое эмбриона крупного рогатого скота
МПА -мясо-пептонный агар
МТТБ -мясо-пептонный бульон
МФА -метод флуоресцирующих антител
МІНИ ТА -мясо-пептонный печеночный глюкозо-глицериновый агар
МРА -метод ристрикционного анализа
нм -наружная мембрана
ПААГ -полиакриламидный гель
ППГГА - печеночно-пептоный глюкозо-глицериновый агар
ПР -праймер
ПЦР -полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ -полимеразная цепная реакция в реальном времени
РА -реакция агглютинации

РНГА

СТАВ

ФАО/ВОЗ

-реакция преципитации -роз-бенгал проба
-реакция непрямой гемагглютинации -суммарные белки клетки -гексадецилтриметиламмониум бромид -цитокины
-продовольственная и сельскохозяйственная организация Объединенных Наций Всемирная Организация Здравоохранения -фактор некроза опухоли

СОДЕРЖАНИЕ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Краткие сведения о биологических свойствах и таксономии
бруцелл
1.2 Характеристика основных свойств бруцелл
1.2.1 Морфология, биохимия, патогенные свойства и изменчивость
бруцелл
1.2.2 Антигенная структура бруцелл
1.2.3 Методы генодиагностики и геноидентификации возбудителей
бруцеллеза
1.2.4 Уровень цитокинеза как показатель иммуномодулирующего
действия антигенных веществ
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы исследований
2.1.1 Материалы
2.1.2 Методы
3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Фенотипические свойства различных штаммов бруцелл
3.1.1 Изучение токсинообразования у бруцелл
3.2 Изучение белкового состава клеточной мембраны
бруцелл
3.3 Получение антигенных компонентов бруцелл и их серологобиохимическая характеристика
3.4 Изучение степени гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК различных штаммов бруцелл
3.5 Изучение влияния различных факторов на иммуногенную
активность вакцинных штаммов бруцелл

пары коротких одноцепочечных молекул ДНК - синтетических праймеров и фермента ДНК-полимеразы.
Метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. В отличие от амплификации ДНК в живых организмах, (репликации), с помощью ПЦР амплифицируются относительно короткие участки ДНК. В обычном ПЦР-процессе длина копируемых ДНК-участков составляет не более 3000 пар оснований (3 kbp). С помощью смеси различных полимераз, с использованием добавок и при определённых условиях длина ПЦР-фрагмента может достигать 20-40 тысяч пар нуклеотидов. Это все равно значительно меньше длины хромосомной ДНК эукариотической клетки. Например, геном человека состоит примерно из 3 млрд. пар оснований.
Изучение рода Brucella в аспекте геносистематики показало, что он является хорошо обособленной, компактной группой бактерий, для которых характерен высокий уровень гомологии ДНК (90-100%), независимо от видимой принадлежности (Мельниченко А.Н., 1983; Verger J.M. е.а., 1985; Aldret-Servent А. е.а., 1989).
Нуклеотидный состав ДНК и размер генома варьируют у бруцелл в незначительной степени и составляют соответственно 56-58% ГЦ и 2,4-2,8x10 дальтон (Коромыслов Г.Ф. и др., 1989; Huddelson J.F., 1933). С представителями же других родов микроорганизмов бруцеллы практически не имеют общих нуклеотидных последовательностей ДНК (не более 1-2 %) (Артюшин
С.К.идр., 1989).
Отмечено также отсутствие заметной дивергенции генома бруцелл при их диссоциации и L- трансформации (Ощепов В.Г., 1991).
Verger J.M. е.а. (1985), используя ДНК-гибридизационпый анализ, изучили 51 биовар, включающий все 6 видов бруцелл. На основании того, что ДНК всех изученных культур гибридизовались в высокой степени, авторы