Определение интегральной резистентности организма методом коли-клиренса

• Автор: Виноходова, Мария Владимировна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 125 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Иммунитет

2.2. Естественная резистентность

2.3. Реактивность организма

2.4. Адаптация

2.5. Иммунодепрессивные состояния

2.6. Фармакокоррекция иммунитета

2.7. Методы контроля биологической активности биостимуляторов и

иммуномодуляторов
2.8. Колибактериоз птиц
3. Собственные исследования
3.1. Материалы и методы исследований
3.2. Результаты исследований
4. Обсуждение
4.1. Разработка тест-модели коли-клиренса
4.2. Измерение резистентности организма методом коли-клиренса
5. Заключение
6. Выводы
7. Практические предложения
8. Список литературы
9. Приложение
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Естественную резистентность организма ученые пытаются измерить в течение последних, как минимум, пятидесяти лет. Это свойство живых организмов вызывает большой интерес у исследователей природы, особенно у патологов, ищущих механизмы и естественные возможности защиты организма животных от воздействий неблагоприятных, часто агрессивных, факторов внешней среды обитания наших пациентов.
Причина такого интереса понятна. Чтобы определить «эффект достаточности» защиты организма от воздействия неблагоприятных факторов внешней среды обитания необходимо её измерить и, методом сравнения у разных организмов и их популяций, установить те пределы показателя, которые позволят нашим пациентам находиться в нормальном состоянии и развитии.
И действительно, ио мнению Дмитрия Ивановича Менделеева: «В природе мера и вес суть главное орудие познания. Наука начинается с тех пор, как начинают измерять, точная наука немыслима без меры». То есть, научный подход к пониманию и анализу естественной резистентности организма может быть определен только количественными методами.
Правительство Российской Федерации осознает необходимость количественного анализа в науке и практике, поскольку от этого зависит эффективность принятых им решений. Свое мнение по этому поводу оно высказало в Федеральном законе «Об обеспечении единства измерений» от 26 июня 2008 года № 102-ФЗ [143], а также в Федеральном законе «О техническом регулировании» от 27 декабря 2002 года№ 184-ФЗ [142].
Настоящая работа посвящена разработке метода измерения интегральной естественной резистентности высших позвоночных организмов (АтпШа), к которым относится большинство сельскохозяйственных животных, включая птиц. В качестве прототипа мы использовали разработанный во Всесоюзном научно-исследовательском ветеринарном институте птицеводства (Ленинград, СССР) метод коли-клиренса.
Контроль состояния здоровья сельскохозяйственных животных и их популяций, поддержание здоровья в физиологических пределах и коррекция по показаниям - одно из важных направлений деятельности в ветеринарии [68, 65, 79].
Эффективно эту задачу решить невозможно без измерения естественных возможностей организма, количественного контроля его физиологического состояния, в частности его естественной резистентности, к воздействию агрессивных агентов внешней среды обитания.
По мнению многих авторов, понижение естественной резистентности организма часто приводит к возникновению болезненного состояния и к болезни, а излишнее повышение - к

проявлению реакций гипсрчувствителыюсти к факторам внешней среды, что сопровождается возникновением аутоиммунных и других патологических процессов [82, 200]. Поэтому количественный контроль величины естественной резистентности — задача актуальная.
Кроме того, в настоящее время не установлены количественные характеристики воздействия на резистентность организма агрессивных факторов внешней среды, таких как стрессы, неудовлетворительные условия содержания и кормления, физические перегрузки и др., а также биологическая активность стимуляторов и иммуномодуляторов, использующихся для профилактики и лечения болезней животных. Без внимания исследователей остаются эффекты воздействия на резистентность организма вакцин и других биопрепаратов.
Поэтому разработка метода измерения интегральной резистентности организма позволит определить норму и количественно охарактеризовать эффекты воздействия на организм ветеринарных препаратов путём сравнения с нормой, плацебо и эффектами других лекарств.
Степень разработанности проблемы. В настоящее время авторами используются различные биохимические и иммунологические показатели, а также их сочетания для оценки неспецифической резистентности разных видов животных. Многие из них считаются наиболее доступными и информативными для характеристики резистентности организма [268, 3, 15, 24, 26, 54,58,61,77,81, 111, 121, 128, 168, 171, 173, 193].
Кроме того, на протяжении последних сорока лет учеными предпринимались попытки определить и измерить биологическую (иммунологическую) активность препаратов, применяемых для повышения естественной резистентности животных.
В настоящее время в человеческой медицине принято проводить доклинические испытания иммунологической активности лекарственных средств [197]. Эти испытания включают оценку иммуномодулирующего действия и характеристику аллергизирующих свойств фармакологических средств по многим показателям. По совокупности их определяют действие лекарств на резистентность организма эмпирически, в крестах.
Таким образом, в настоящее время не существует единого подхода к измерению и контролю естественной резистентности организма. Нет также и общепринятого метода измерения этой величины, а, следовательно, не определены такие понятия как норма резистентности (нормальная резистентность организма), изменения нормы, отклонения от нормы, не установлена величина биологической активности иммуномодуляторов и иммунодепрессантов, используемых в клинической практике. Не имеется также и общепринятой единицы измерения резистентности организма.
На наш взгляд, использование предложенного нами метода для измерения резистентности организма позволяет решить все перечисленные выше проблемы.

значенне положительного контроля.
Для каждого метода оценю» + (0—25%) рассматривается как слабый модулирующий эффект, ++ (25—50%) как выраженный модулирующий эффект, +++ (50—75%) как сильный выраженный модулирующий эффект, 1111 (75—100% и более) как очень сильный модулирующий эффект фармакологического средства. В случае превышения значений положительного контроля модулирующий эффект фармакологического средства рассматривается как очень сильный.
По мнению авторов, предлагаемый ими комплексный методический подход позволяет ранжировать иммуномодуляторы (а также фармакологические средства с иной основной фармакодинамикой) и определить необходимый объем основных и дополнительных методов оценки их иммуномодулирующего действия.
В ветеринарии иммуностимулирующее действие препаратов, как правило, определяют комплексно по результатам следующих исследований. Для анализа используют различные модели инфекции на лабораторных животных, цыплятах, курах и др. Проводят клинические, патологоанатомические исследования, количественную оценку содержания лнзосомалыю-катионных белков в лимфоцитах, исследование бактерицидной активности лизоцима, сыворотки крови, определяют концентрацию (3-лнзинов, пропердина, изучают фагоцитарную активность зернистых лейкоцитов, содержание общего белка, его фракций и иммуноглобулинов в сыворотке крови. Реже определяют количество форменных элементов крови, количество лейкоцитов, используют гистологические исследования, показатели гомеостаза, контрола продуктивности и другие методы.
Для контроля биологической активности биостимуляторов и, в частности, иммуномодуляторов многие авторы используют по нескольку различных методик и по совокупности результатов судят о биологической активности исследованного препарата [57, 147 и др.].
Кроме того, исследуются процессы перекисного окисления липидов в организме как фактор естественной резистентности [28] и другие биохимические показатели [105, 206].
2.7.1. Интегральные методы определения естественной резистентности организма н биологической активности иммунотроиных препаратов
Одним из первых методов, позволяющих измерить интегральную стимулирующую активность биостимуляторов, был метод титращш на куриных эмбрионах, предложенный Виноходовым В. В. [32, 33]. Это позволило оценить стимулирующую активность лейкоцитарной плазмы и, в дальнейшем, биологически обогащенной сыворотки крови кур [34, 38] в условных «эмбриональных единицах активности» (ЭЕА), а также сравнить по стимулирующей активно-