Иммунобиологические свойства штамма ERA G333 вируса бешенства для изготовления оральной антирабической вакцины

• Автор: Баньковский, Денис Олегович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 123 с. : ил.

Список сокращений

— антиген;

ВНК-21 — перевиваемая культура клеток почки сирийского хомячка;

Бри - Фокус-формирующие дозы;

- десятичный логарифм;

Ы1Ы - национальные институты здравоохранения;

УЕЛО — перевиваемая культура клеток почки зеленой мартышки;

АРВ - антирабическая вакцина;

БелНИИЭВ - Белорусский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии;

БП - биологическая проба;

в/м — внутримышечно;

вгнки - ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и
стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»);
ВНА - вируснейтральзующие антитела;
ВНИИВВиМ - ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии»;
ВНИИЗЖ - ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»
ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения;
ВСМ - вируссодержащий материал;
ГА - гемагглютинирующие антитела;
ДЭИ - димер этиленимина;
ЗФР - забуференный физиологический раствор;
и/ц - интрацеребрально;
кДНК — комплементарная ДНК;
ЛД50 (МЛД50) - 50%-ная летальная доза (50%-ная мышиная летальная доза); МА — моноклональные антитела;
МЕ - международная единица;
МПА - мясопептонный агар;

МПБ - мясопептонный бульон;
МППБ - мясопептонный бульон под вазелиновым маслом;
МЭБ - Международное эпизоотическое бюро;
НГУК - перевиваемая культура клеток невриномы гассерова узла
крысы;
ОТ-ГТЦР - обратнотранскриптазная полимеразная цепная реакция; ПА - преципитирующие антитела;
ПК - первичная культура клеток почки кролика;
п/к - подкожно;
ГІС - перевиваемая культура клеток почки сайги;
ПЭГ - полиэтиленгликоль;
РИФ - реакция иммунофлуоресценции;
PH - реакция нейтрализации;
РНК - рибонуклеиновая кислота;
т.п.о. - тысяч пар оснований;
ТФ ИФА - твердофазный иммуноферментный анализ;
ФБР-Т - фосфатнобуферный раствор - твин;
ФИТЦ - флуоресцеинизотиоционат;
ЦНС - центральная нервная система;
ЦПД - цитопатическое действие;

1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Классификация, структура и свойства вируса бешенства
2:2. Антигенные свойства вируса бешенства
2.3. Эпизоотологические особенности бешенства
2.4. Проблемы бешенства в Российской Федерации
2.5. Оральная вакцинация
2.6. Штаммы вируса бешенства
2.7. Требования к приманкам
2.8. Новые вакцинные штаммы и типы приманок
2.9. Обоснование выбора вакцинного штамма вируса бешенства
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1.1. МАТЕРИАЛЫ
3.1.1.1. Вирусы
3.1.1.2. Животные
3.1.1.3. Культуры клеток
3.1.1.4. Среды и растворы
3.1.1.5. Реактивы
3.1.1.6. Оборудование
3.1.2. МЕТОДЫ
3.1.2.1. Культивирование вируса
3.1.2.2. Определение инфекционной активности вируса
3.1.2.2.1. Титрование вируса в культуре клеток
3.1.2.2.2. Титрование вируса на белых мышах
3.1.2.2:3'. Выделение вируса в культуре клеток
3.1.2.3. Определение контаминации бактериальной и грибной
микрофлорой
3.1.2.4; Определение вирулентности вируса для животных

Штамм Внуково-32 является? вариантом фиксированного? штамма-ЗАО; прошедшего 10 чередующихся? пассажей в культуре клеток почки сирийского хомячка? (ПСХ) и мозга мышей при? обычной (37° С) и 32 пассажа в ПСХ? при? пониженной? (32° С, 26-28° С) температурах. При оральном введении, десятикратных доз вирус апатогенен для. плотоядных (лис, песцов, собак и кошек), для хищных птиц (евразийская пустельга), а также грызунов. Штамм сохранил патогенность для грызунов при внутримышечном способе введения [130].
Вирус бешенства, штамм V-319 выделен из' слюнной? железы вампира в Мексике [66], после чего фиксирован в мозге мышей-сосунов?и адаптирован к культуре клеток фибробластов эмбриона летучей мыши. Во ВНИИВВиМ Г.А. Сафоновым и др. методом клонирования, штамм был адаптирован к перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и получил название-ТС-80. Авторами было показано, что на уровне 60 пассажа в клетках ВНК-21 вирус размножается без признаков ЦПД, накапливается, с инфекционной активностью 6,5-7,0 lg МЛДбо/см3, является авирулентным для овец при внутримозговом введении, а также для телят, собак и кошек при внутримышечной инокуляции. Внутримышечное введение культуральной вируссодержащей жидкости вызывает образование у животных антирабических ВНА [38].
В 1990 г. вирус бешенства, штамм ТС-80 на уровне 10 пассажа был адаптирован В.А. Балабановым, Т.В. Сологуб, И.В. Никишиным-и др. [4] к перевиваемой культуре клеток ПС. В 1995 г. штамм ТС-80 на уровне 70-го пассажа в этой же клеточной системе был взят за основу при конструировании инактивированной вакцины против бешенства животных [10].
В 2003 г. И.А. Сливко при изучении? иммунобиологических свойств штамма ТС-80 было установлено, что данный штамм является авирулентным для овец, кроликов .и тхорзофреток; при интрацеребральной, внутримышечной и подкожной инокуляции в дозе 7,