Иммунобиологические свойства вируса инфекционного бронхита кур генотипа QX

• Автор: Абдуллоев, Хушбахт Сатторович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 115 с. : ил.

Оглавление
Введение

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л Общие сведения о болезни

1.2 Таксономия вируса

1.3 Физико-химические свойства вируса

1.4 Особенности эпизоотологии и патогенез

1.5 Диагностика и классификация штаммов вируса ИБК

1.6 Инфекционная активность вируса ИБК

1.7 Иммунитет

1.7 Л Пассивный иммунитет
1.7.2 Активный иммунитет
1.8 Контроль и профилактика ИБК
1.9 Заключение по обзору литературы
2. Собственные исследования
2.1 Материалы
2.2 Методы исследования
2.2.1 Оценка эпизоотической ситуации
2.2.2 Подготовка вируссодержащего материала
2.2.3 Определение условий культивирования штамма QX вируса
ИБК на куриных эмбрионах
2.2.4 Репродукция вируса на культурах клеток
2.2.5 Титрование вируса
2.2.6 Определение степени антигенного родства
2.2.7 Оценка патогенных свойств штамма QX
2.2.8 Оценка протективной функции вакцины из штамма Н120 серотипа Mass против заражения штаммом QX
2.2.8.1 Тест на цилиостаз
2.2.8.2 Выделение нуклеиновой кислоты
2.2.8.3 ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) и

секвенирование фрагмента гена Б1
2.2.9 Статистическая обработка результатов экспериментов
3. Результаты собственных исследований
3.1 Вирус ИБК генотипа ОХ. Эпизоотическая ситуация
3.2 Культивирование вируса ИБК штамма ОХ в КЭ и в культурах клеток
3.3 Оценка антигенной чистоты рабочих расплодок
3.4 Изучение антигенной «удаленности» штамма ОХ по отношению к другим штаммам вируса ИБК
3.4.1 Исследование гомологичной нейтрализующей активности иммунных сывороток крови кур
3.4.2 Оценки антигенной удаленности штамма ОХ по отношению к другим штаммам вируса ИБК
3.4.3 Сравнение антигенных свойств вируса ИБК штаммов ОХ и
Ы148 в реакциях с сыворотками к вирусам Н120,4/91, 027, и ОХ
3.5 Патогенные свойства штамма ОХ
3.6 Использование теста на цилиостаз и ПЦР для оценки результативности вакцинации (протективного действия) вакцины
3.7 Обсуждение результатов исследования
4. Заключение
4.1 Выводы
4.2 Практические предложения
5. Список сокращений и условных обозначений
6. Список литературы
7. Приложения
Введение
Актуальность темы. Инфекционный бронхит кур - вирусная высококонтагиозная болезнь птиц, возбудителем которой является представитель семейства Coronaviridae, Avian infections bronchitis virus. Болезнь имеет широкое распространение и поражает птиц всех возрастов и направлений продуктивности. Характеризуется многообразием клинических признаков, вызывая поражения респираторной, мочевыделителыюй, репродуктивной и пищеварительной систем. Развитие заболевания среди восприимчивого поголовья сопровождается значительными экономическими потерями, которые складываются из гибели молодняка птиц (до 20% поголовья), снижения привесов, снижения яичной продуктивности и др. Профилактические мероприятия, направленные на предупреждение инфекции, значительно осложняются антигенной вариабельностью возбудителя, количество вариантов которого превышает 50 серотипов. Столь гетерогенная популяция вируса ИБК объясняется, во-первых, природой РНК-содержащих вирусов, склонных к мутациям, во-вторых, интенсивным применением живых вакцин, в-третьих, иммунным прессингом со стороны вакцинированного организма, что способствует преимущественному отбору и закреплению новых серовариантов вируса. На сегодняшний день нет чётких рекомендаций по классификации выделяемых изолятов вируса ИБК, но наиболее часто для этих целей используются молекулярные и серологические методы. В настоящий момент молекулярные методы диагностики вируса ИБК имеют первостепенное значение в диагностике ИБК. Многочисленные исследования по классификации штаммов вируса ИБК показали, что данные молекулярной диагностики совпадают с данными серологической диагностики.
В разный период времени на конкретных территориях имеет распространение определённый антигенный спектр вируса ИБК. Так, на примере Европы можно проследить, что голландские варианты вируса ИБК (штаммы D1466, D274) были доминирующими в 1980-е гг., серотип UK793B (штамм 4/91) -в начале 1990-х гг., итальянские штаммы серотипа Italy 02 - в конце прошлого

10. Среды культуральные Игла, 199, ПСС, ПСП, а также DMEM или DMEM/F12 (Sigma, США).
11. Желатин порошкообразный из кожи свиней, тип A (Sigma, США).
12. Антибиотики (бензилпенициллина натриевая соль, стрептомицина сульфат, гентамицина сульфат (4% раствор), «Байтрил» (5 и 10% растворы).
Все реактивы имели квалификацию «ч.д.а.» и «х.ч.», для приготовления растворов использовали бидистиллированную или деминерализованную воду.
2.1.5 Диагностикумы
Использовали набор для обнаружения антител к вирусу ИБК в непрямом ИФА, Synbiotics (США). В соответствии с Инструкцией по использованию набора определяли наличие антител к вирусу ИБК в сыворотке крови. Положительной оценкой реакции считали величину Sp>0,150 что соответствует титру антител 1:165. Отрицательным значением титров антител считали значения 1:164 и ниже.
Набор РТГА для выявления антител к вирусу ИБК (производитель GD Animal Health, Нидерланды). РТГА выполняли согласно Инструкции по применению набора.
2.1.6 Оборудование и лабораторная посуда
В процессе выполнения экспериментальных работ использовали следующее оборудование:
- низкотемпературные холодильники MDF-792 и U5386S («Sanyo», Япония);
- термостат электрический с водяной рубашкой тип ЗЦ-1125 (Украина);
- С02 термостат Sanyo МСО-15АС (Япония);
- магнитные мешалки ММ-ЗМ (Россия);
- инвертированный микроскоп «Макромед И» (Россия);
- центрифуга «Mistral 6L» (Measuring Scientific equipment LTD, Англия);
- культуральные пластиковые флаконы и плашки («Costar», США);
- пипетки серологические одноразовые;
- автоматические дозаторы 25 мкл-1000мкл;