Структурно-функциональная организация гена P53 свиней и его полиморфных вариантов

• Автор: Никулин, Артем Валерьевич
• Шифр специальности: 06.02.01, 06.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Саранск
• Количество страниц: 126 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. Обзор литературы

ЕЕ Регуляция транскрипции генов как основа для создания специализированных фенотипов

1.2. Структура и функция генар53. Полиморфные и мутантные формы гена р53

1.3. Экспрессия гена р53 и его аллельных форм

1.4. Роль белка Р53 в регуляции экспрессии генов. Влияние мутаций

генар53 на реализацию р53-зависимых программ клеточного управления

1.5. Липиды ядра

II. Материалы и методы исследования

2.1. Объект исследования
2.2. Постановка эксперимента
2.3. Получение моноцитов крови
2.4. Определение жизнеспособности клеток
2.5. Инкубация моноцитов
2.6. Окрашивание по Паппенгейму-Крюкову
2.7. Окрашивание Hoechst 33258
2.8. Выделение ядер моноцитов
2.9. Экстракция липидов из моноцитов и их ядер
2.10. Определение диеновых, триеновых конъюгатов и малонового диальдегида в моноцитах и их ядрах
2.11. Фракционирование липидов в тонких слоях силикагеля и
их количественное определение
2.12. Выделение мРНК
2.13. Проведение реакции обратной транскрипции
2.14. Полимеразная цепная реакция в реальном времени

2.15. Выделение ДНК из крови
2.16. Амплификация промоторной области генар53
2.17. Очистка амплификата
2.18. Выделение амплификата из агарозного геля
2.19. Молекулярное моделирование взаимодействия липидов с ДНК
2.20. Эксперементальное исследование эффективности связывания холестерола с нуклеотидными последовательностями
спектрофотометрическим методом
2.20. Амплификация для секвенирования
2.21. Секвенирование
2.22. Статистическая обработка результатов
III. Результаты собственного исследования
3.1. Структурно-функциональная организация генар53 млекопитающих
3.2. Оценка степени гомологии генар53 млекопитающих
3.3. Мутационная изменчивость генар53
3.4. Небелковая регуляция экспрессии генар53: роль липидов в апоптозе моноцитов, влияние холестерола на транскрипцию гена р53
3.5. Компьютерное моделирование и экспериментальное
связывания холестерола с промоторной областью генар53
Обсуждение результатов
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
AMT - аминометилтрансфераза
Cdk - циклинзависимые киназы
Р13К — фосфоинозотол 3 киназа
TFII — транскрипционный фактор генов класса II
АИ - апоптотический индекс
АТФ — аденозин трифосфат
ДАТ - диацилглицерол
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ЛПС - липополисахарид
ПОЛ - перекисное окисление липидов
РНК - рибонуклеиновая кислота
ТАФ - ТСБ-ассоциированный фактор
ТСБ - ТАТА-бокс связывающий белок

транскрипцию других генов-мишеней. Эта, так называемая репрессионная, форма также фосфорилирована по И-концу, но ее С-концевой участок не ацетилирован и связывает репрессионные комплексы втЗ/НОАС, вызывающие конденсацию хроматина генов-мишеней (Копнин и др., 2008).
Характерные для опухолевых клеток аномалии гена р53 отменяют или ослабляют все важнейшие функции опухолевого супрессора Р53. Делеция обоих аллелей гена р53, то есть его полная инактивация, вызывает ослабление 01- и 02-чекпойнтов клеточного цикла, подавление индукции апоптоза, уменьшение эффективности репарации ДНК, более эффективную адаптацию к гипоксии и стимуляцию неоангиогенеза, ослабление контроля за длиной теломер, ингибирование дифференцировки и другие характерные свойства неопластической клетки. Особо следует отметить возникновение в клетках с инактивированным геном р53 сильной генетической нестабильности, являющейся мотором дальнейшей опухолевой прогрессии. Потеря функциональной активности гена р53 значительно увеличивает темп появления размножающихся клеток с самыми разными генетическими аномалиями - измененным числом и перестройками хромосом, генными мутациями, амплификацией отдельных участков генома (Тагароге еР а1., 2005).
Сходные последствия наблюдаются и при самых частых в новообразованиях человека аномалиях гена р53 — миссенс-мутациях, ведущих к синтезу неактивного белка, обладающего доминантно-негативным эффектом в отношении продукта неповрежденного аллеля. Следует заметить, однако, что степень проявления доминантно негативного эффекта мутантного гена р53 варьирует в зависимости от конкретной аминокислотной замены, типа клеток и ингибируемой белковой функции Р53 дикого типа. Поэтому нередко селективное преимущество получают клоны клеток, в которых в результате дополнительных генетических событий происходит делеция или мутация и второго аллеля гена р53. В то же время, опухолевые клетки, как правило, сохраняют экспрессию хотя бы одного