Полиморфизм микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота красно-пестрой породы

• Автор: Шумкина, Светлана Григорьевна
• Шифр специальности: 06.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: п. Лесный Поляны Московской обл.
• Количество страниц: 105 с. : ил.

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Генетическая характеристика микросателлитных локусов генома

1.2. Методы исследования микросателлитов

1.3. Использование полиморфизма микросателлитных локусов генома для оценки генетической гетерогенности крупного рогатого скота
1.4. Использование микросателлитных локусов для оценки продуктивных признаков крупного рогатого скота

2 .МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Оптимизация ДНК-технологии оценки полиморфизма микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота

3.2. Полиморфизм микросателлитных локусов генома крупного рогатого скота

3.2.1. Полиморфизм микросателлитного локуса ЛМ388

3.2.2. Полиморфизм микросателлитного локуса ЕТН10

3.2.3. Полиморфизм микросателлитного локуса ЕТН225
3.2.4. Полиморфизм микросателлитного локуса Э1К083
3.3. Оценка возможности использования полиморфизма микросателлитных локусов 1ТМ388, ЕТН10, ЕТН225,
Б1К083 для оценки генетической дифференциации красно - пестрой породы скота
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Актуальность работы. Для совершенствования селекционноплеменной работы требуются новые критерии отбора, помогающие выявить животных с высокими племенными характеристиками. Достижения молекулярной биологии дают возможность оценки животных не только по фенотипическим признакам, но и непосредственно по генотипу, что обеспечит селекционерам возможность точной и быстрой идентификации животных с высоким генетическим потенциалом по определенным признакам продуктивности.
Генетическая оценка животных стала значительно более эффективной в результате открытия семейств повторяющихся последовательностей, дислоцированных по всему геному (минисателлитов и микросателлитов). Микросателлитные последовательности ДНК в последнее время играют доминирующую роль в качестве неисчерпаемого источника генетических маркеров. В настоящее время выделено и описано более 2000 микросателлитов в геноме крупного рогатого скота (база данных INRA, Франция) и их количество увеличивается с каждым днем.
Микросателлиты имеют ряд преимуществ перед другими маркирующими системами: они множественны, высокополиморфны, широко распространены по всем хромосомам, легко выявляются и идентифицируются.
С открытием микросателлитов появилась возможность точно определить достоверность происхождения животных, а так же осуществить маркировку некоторых генетических локусов, связанных с продуктивностью (George М. et al., 1993; Ron М. et al.,1994; Charlier C. et al., 1995; Georges M. et al., 1995; Ohba Y. et al.,1999; Velmala R.J. et al., 1999; Ashweii M.S. et al., 1999; Heyen D. W. et al., 1997; Kato Y. et al., 1998; Peelman L., Mortiaux F., et al., 1998; Velmala R., Vilkki J. et al., 1995).
В 1996 году Международным обществом генетиков (ISAG) было рекомендовано использование молекулярных генетических тестов, основанных на полиморфизме микросателлитных локусов ДНК, для определения достоверности происхождения крупного рогатого скота.
В настоящее время идентифицированные микросателлиты составляют значительную группу генетических маркеров удобных для целого ряда исследований, таких как характеристика генетической структуры популяций и степени инбредности, оценка генетических расстояний между семействами, линиями, породами и видами животных, филогенетических исследований (Machugh D.E. et al., 1998; Peelman L.J. et al., 1998; Slate J. et al., 1998).
Применение микросателлитных маркеров даёт возможность определять корреляцию между хозяйственно-полезными признаками и определяющими их генетическими структурами, проводить селекционную работу с линиями, популяциями, породами и стадами, а так же вести отбор животных с желательными генотипом в любом возрасте (Lipkin E. et al., 1998; Spelman R.J., Bovenhuis H., 1998).
Следует отметить, что породы и популяции крупного рогатого скота различаются по количеству аллельных вариантов и уровню гетерозиготно-сти изученных микросателлитных локусов. Данные по генетической гетерогенности крупного рогатого скота отечественной селекции практически отсутствуют. Имеются лишь результаты исследований нескольких микросателлитных локусов у коров черно-пестрой породы (Симоненко В.П., 1999; Шмидт Т.Ю., 2001).
Цель нашей работы - оценка полиморфизма микросателлитных локусов генома красно-пестрой породы крупного рогатого скота.
Были поставлены следующие задачи:
1. Отобрать потенциально информативные микросателлитные локусы для красно-пестрой породы крупного рогатого скота.

DIK083
RM388
ЕТНІ
Рис. 13. Результаты электрофоретического разделения аллельных вариантов микросателлитных локусов ДНК животных красно-пестрой породы при одновременном проведении амплификации: 1- RM388+DIK083, 2-ЕТН225 + ЕТН10, М- Маркер Ladder 100 bp.
Размер амплифицированных участков ДНК каждого микросателлит-ного локуса определяли в соответствии с включенными в каждый гель маркерными фрагментами с помощью компьютерной программы для расчета длин фрагментов UN-SCAN-GEL Automated Digitzing System (Version
5.1 (32-bit), (Silk Scientific, Inc. P.O. Box 533 Orem, Utah 84059 USA, Customer Support).
Эта программа разработана для фотодокументирования, сохранения изображений и составления баз данных. Позволяет совершать все необходимые операции по обработке результатов электрофореза, автоматически определяет линии и метки, подсчитывает молекулярный вес, количество, площадь и интенсивность пиков. Примеры обработки результатов электрофоретического разделения микросателлитных последовательностей приведены на (рис. 14, 15, 16, 17).